本文關(guān)鍵詞：牦牛輪狀病毒VP6基因序列分析及RT-PCR檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用

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【摘要】：輪狀病毒(rotavirus,RV)VP6基因是RV的主要分子檢測(cè)靶點(diǎn),但該基因的點(diǎn)突變會(huì)影響RV的分子檢測(cè)。本試驗(yàn)的目的是在研究牦牛RVVP6基因遺傳變異的基礎(chǔ)上,建立檢測(cè)牦牛RV的RT-PCR方法并應(yīng)用于臨床樣本檢測(cè)。采用Prime 5.0設(shè)計(jì)引物,從30個(gè)牦牛腹瀉樣本中擴(kuò)增得到14個(gè)位于931—1 338bp牦牛RVVP6基因片段。序列分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),與牛輪狀病毒(bovine rotavirus,BRV)相比,牦牛RVVP6基因在931—1 110bp間出現(xiàn)多處點(diǎn)突變,而在1 100—1 338bp之間序列高度保守。據(jù)此設(shè)計(jì)檢測(cè)引物,成功建立了檢測(cè)牦牛RV的RTPCR方法,具有良好的特異性和穩(wěn)定性,只擴(kuò)增出牦牛RV及BRV的特異片段,對(duì)其他無(wú)關(guān)病原無(wú)擴(kuò)增;檢測(cè)下限為0.45pg·μL~(-1),靈敏性較好。所建立方法對(duì)牦牛RV的檢出率明顯優(yōu)于現(xiàn)有檢測(cè)BRV的RT-PCR方法,為牦牛RV病的診斷和流行病學(xué)調(diào)查提供了可靠的方法;對(duì)BRV的檢出也與其他方法具有很好的符合率,也可以用于BRV的檢測(cè)。對(duì)234份犢牦牛腹瀉糞便樣本的RV檢出率:西藏為60.00%(36/60)、青海為95.00%(57/60);四川為85.19%(46/54);云南為90.00%(54/60),證明牦牛RV感染是當(dāng)前導(dǎo)致?tīng)訇笈８篂a的重要原因。
【作者單位】： 西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院/四川省教育廳重大動(dòng)物疫病防控技術(shù)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì);
【關(guān)鍵詞】： 牦牛 輪狀病毒 VP基因 點(diǎn)突變 RT-PCR
【基金】：“十二五”科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2012BAD13B06) 四川省科技計(jì)劃項(xiàng)目青年基金(2014JQ0044)
【分類號(hào)】：S852.653
【正文快照】： 國(guó)內(nèi)外研究表明,牛輪狀病毒(bovine rotavir-us,BRV)是引起犢牛腹瀉的主要病因,世界范圍內(nèi)流行,給全球養(yǎng)牛業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失[1-2]。BRV為呼腸孤病毒科輪狀病毒屬,無(wú)囊膜雙鏈RNA病毒,分11個(gè)基因節(jié)段,由三層衣殼組成,分別編碼6種結(jié)構(gòu)蛋白(VP1~VP4、VP6、VP7)和6種非結(jié)構(gòu)蛋白

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：738608