本文關(guān)鍵詞：河川沙塘鱧TLR2基因的克隆及表達(dá)分析

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【摘要】：本研究以河川沙塘鱧(Odontobutis potamophila)為研究對(duì)象,采用RACE、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等技術(shù),首次對(duì)該魚(yú)的TLR2基因進(jìn)行了克隆和表達(dá)模式分析。主要研究結(jié)果如下:TLR2基因的c DNA全長(zhǎng)序列為3 473 bp,包括2 631 bp開(kāi)放閱讀框(ORF)、75 bp的5'UTR區(qū)和767 bp的3'UTR區(qū),并且具有脊椎動(dòng)物典型的加尾信號(hào)AATAAA和26 bp的poly A尾巴,推測(cè)該序列編碼876個(gè)氨基酸。蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)表明TLR2蛋白的TIR結(jié)構(gòu)域和LRR基序符合TLR家族的共同特征,其蛋白分子也存在多個(gè)功能位點(diǎn)。系統(tǒng)樹(shù)中河川沙塘鱧與所有魚(yú)類(lèi)聚類(lèi)為獨(dú)立的分支,與鱸形目親緣關(guān)系最近。應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)健康河川沙塘鱧魚(yú)體中TLR2基因的m RNA組織表達(dá)差異情況。結(jié)果顯示,TLR2基因在檢測(cè)的12種組織中均有表達(dá),在肝、腎、腸、血液和胃中都有較高的表達(dá)水平。人工感染嗜水氣單胞菌后,對(duì)河川沙塘鱧3種主要免疫組織(脾、腎、肝)中進(jìn)行不同時(shí)段表達(dá)量變化的檢測(cè),結(jié)果表明,TLR2基因在脾中感染后4 h表達(dá)水平發(fā)生下降,隨后的24~48 h又上升,48 h時(shí)達(dá)到頂峰,72~96 h維持在略低于24 h水平上。在腎中,感染后表達(dá)水平持續(xù)上升,且24~96 h間保持相對(duì)穩(wěn)定的表達(dá)水平。在肝組織中,感染后一直呈現(xiàn)上升趨勢(shì),72 h時(shí)達(dá)到頂峰,其他時(shí)段表達(dá)水平相差不大。可見(jiàn)TLR2在河川沙塘鱧抵御外源微生物侵染的先天免疫中發(fā)揮重要作用。
【作者單位】： 南京師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院江蘇省生物多樣性與生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;南京市水產(chǎn)科學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 河川沙塘鱧 TLR RT-PCR 表達(dá)分析
【基金】：江蘇省科技支撐計(jì)劃(農(nóng)業(yè))項(xiàng)目(BE2013441) “江蘇省六大人才高峰”高層次人才項(xiàng)目(2012-NY-032) 南京師范大學(xué)科技成果轉(zhuǎn)化基金項(xiàng)目(2013-02) 江蘇省2015年度普通高校研究生實(shí)踐創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目(SJLX15_0300)共同資助
【分類(lèi)號(hào)】：S917.4
【正文快照】： 河川沙塘鱧(Odontobutis potamophila)為我國(guó)特有的小型淡水底棲肉食性經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)(伍漢霖等,1993),目前對(duì)河川沙塘鱧的研究主要集中在選育種和養(yǎng)殖等方面(張君等,2011;張麗娟等,2013;Zhu et al.,2014),對(duì)其免疫相關(guān)基因和抗病因子的研究未見(jiàn)報(bào)道。因此,開(kāi)展河川沙塘鱧的免疫相關(guān)

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