本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)染Jumonji基因致心衰犬血清TGF-β1和CTGF動態(tài)變化的研究

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【摘要】：目的:探討轉(zhuǎn)染Jumonji基因?qū)е滦乃ト逯蠺GF-β1和CTGF動態(tài)變化機制。方法:實驗比格犬采用隨機分組方法,隨機分為假手術(shù)組(A組):僅植入起搏器,不行右心室快速持續(xù)起搏刺激。將造模成功的心衰犬隨機分為2個亞組(B組和C組),每組6只。心衰+AAV9-EGFP組(B組):心衰犬經(jīng)胸腔心包腔內(nèi)注射500μL EGFP(綠色熒光蛋白,滴度1×1012 vg)基因的腺相關(guān)病毒溶液后,再繼續(xù)行右心室快速起搏14天。心衰+AAV9-Jumonji-EGFP組(C組):心衰犬經(jīng)胸腔心包腔內(nèi)注射500μL攜帶Jumonji基因的腺相關(guān)病毒溶液(滴度1×1012 vg)后,再繼續(xù)行右心室快速起搏14天。持續(xù)快速右心室起搏心衰犬模型造模成功后,測量左室射血分?jǐn)?shù)(Left Ventricular Ejection Fraction,LVEF)、心衰標(biāo)準(zhǔn)平均動脈壓(mean artery pressure,MAP),測定兩組心肌HE染色和電鏡觀察心肌組織病理組織和超微結(jié)構(gòu)改變,酶聯(lián)免疫法檢測犬血清TGF-β1和CTGF,然后采用免疫組化法,RT-PCR和Western blot檢測Jumonji基因和蛋白變化。結(jié)果:1.心衰模型制作手術(shù)成功并順利完成實驗。模型組12只犬經(jīng)持續(xù)快過30天快速持續(xù)右心室起搏后比格犬出現(xiàn)不同程度的食欲降低、活動量減少、呼吸頻率加快等心衰癥狀,心衰標(biāo)準(zhǔn)平均動脈壓(mean artery pressure,MAP)60 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),射血分?jǐn)?shù)50%,心肌超微結(jié)構(gòu)顯示:肌溶解,線粒體變長。閏盤扭模糊和不連續(xù)。2.經(jīng)胸腔心包腔注射AAV9-Jumonji-EGFP基因轉(zhuǎn)染后,左右心室冰凍切片均顯示大量綠色熒光蛋白表達(dá),呈強陽性。免疫組化檢測犬左右心室心肌Jumonji表達(dá)顯示:可見大量棕色顆粒表達(dá)。犬左右心室Jumonji和蛋白表達(dá)顯示可見犬左右心室Jumonji與β-actin基因和蛋白比較表達(dá)增強。結(jié)論:1.快速持續(xù)起搏右心室30天時,心衰+AAV9-Jumonji-EGFP組犬成功制作心衰模型,血清中MAP和LVEF均明顯降低,轉(zhuǎn)染Jumonji基因14天后,MAP和LVEF均恢復(fù)到正常水平,提示Jumonji基因可明顯改善心衰。2.快速持續(xù)起搏心室致心衰犬血清TGF-β1和CTGF比基礎(chǔ)水平明顯升高,研究結(jié)果與上述國外臨床及基礎(chǔ)研究結(jié)果一致。而給予AAV9-Jumonji后,TGF-β1和CTGF水平明顯下降,結(jié)合MAP和LVEF值下降,結(jié)果顯示,Jumonji基因通過抑制TGF-β1和CTGF水平增加來逆轉(zhuǎn)心肌纖維化,改善心衰癥狀。
【關(guān)鍵詞】：心衰 Jumonji基因 TGF-β1 CTGF
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R541.6
【目錄】：

• 中英文縮略詞對照表5-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 前言12-14
• 內(nèi)容與方法14-20
• 1.實驗材料14-15
• 1.1 研究對象14
• 1.2 實驗動物分組14
• 1.3 實驗器械和儀器14-15
• 1.4 實驗藥品和試劑15
• 2.實驗方法15-19
• 2.1 持續(xù)快速右心室起搏犬致心衰模型制作15-16
• 2.2 超聲心動圖檢查心臟形態(tài)和功能16
• 2.3 標(biāo)本采集和病理形態(tài)學(xué)觀察16
• 2.4 經(jīng)胸心包腔注射AAV9-Jumonji-EGFP基因轉(zhuǎn)染16-17
• 2.5 AAV9-Jumonji-EGF表達(dá)檢測17
• 2.6 酶聯(lián)免疫法檢測犬血清TGF-β1 和CTGF17-18
• 2.7 RT-PCR 和 Western blot 檢測 Jumonji 在犬各組織中的表達(dá)18-19
• 3 統(tǒng)計方法19
• 4 質(zhì)量控制19-20
• 結(jié)果20-27
• 討論27-31
• 小結(jié)31-32
• 致謝32-33
• 參考文獻33-36
• 綜述36-44
• 參考文獻41-44
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)位論文44-45
• 導(dǎo)師評閱表45

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1 張瑩,張郁,孫葉方,史俊南;TGF-β對人牙乳頭間充質(zhì)細(xì)胞堿性磷酸酶的影響[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;1999年04期

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4 鄒貴勉,張t，

本文編號：725537