發(fā)布時間：2017-08-21 17:13

  本文關鍵詞：應用TALEN技術定點突變水稻苯達松抗性基因CYP81A6

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【摘要】：基因打靶技術可以定向改變細胞或生物遺傳信息,正逐步成為功能基因組學研究的重要分子生物學手段。其中,類轉錄激活因子效應物核酸酶(transcription activator-like effector nuclease,TALEN)技術已在多個農(nóng)作物中實現(xiàn)基因的定點修飾,其已成為作物分子育種一種有效的技術手段。本研究利用TALEN技術,將水稻(Oryza sativa)基因組中已知的苯達松(bentazone)抗性基因CYP81A6進行定點突變,以創(chuàng)制苯達松敏感突變體育種材料。通過農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)介導轉化粳稻品種武運粳7號(Oryza sativa subsp.japonica‘Wuyunjing 7’)愈傷,共獲得110株T0水稻陽性轉化苗,利用改良的PCR模板快速制備方法并結合高分辨率溶解曲線(high resolution melting,HRM)檢測技術篩選T0代陽性植株,獲得3株CYP81A6基因突變體材料,定點突變效率約為2.73%。基因測序分析及田間測試結果表明3株材料存在不同形式的基因序列變異,且均為嵌合體材料。對T1代群體繼續(xù)進行苯達松敏感測試,發(fā)現(xiàn)該群體仍會出現(xiàn)大量的苯達松敏感植株,但未能篩選到純合突變體。本研究雖未能獲得穩(wěn)定遺傳的苯達松敏感基因純合水稻突變體材料,但為下一步優(yōu)化試驗方案及繼續(xù)篩選突變體積累了豐富的經(jīng)驗。
【作者單位】： 首都師范大學生命科學學院;深圳市作物分子設計育種研究院/深圳市分子設計育種重點實驗室;深圳興旺生物種業(yè)有限公司;
【關鍵詞】： TALEN 水稻 苯達松 定點突變 嵌合體
【基金】：廣東省引進創(chuàng)新科研團隊計劃資助項目(No.201001S0104725509) 深圳市技術開發(fā)項目(No.CXZZ20140411140647863) 深圳市農(nóng)業(yè)科技成果轉化資金項目(No.NYKJ20140922151049440) 深圳市農(nóng)業(yè)發(fā)展專項(No.201405132333007970)
【分類號】：S511
【正文快照】：

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本文編號：714108