本文關(guān)鍵詞：蘋果sMdCAX1基因超表達(dá)載體的構(gòu)建及遺傳轉(zhuǎn)化

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【摘要】：為使sMdCAX1基因能在蘋果中高效表達(dá),改善蘋果對Ca~(2+)吸收轉(zhuǎn)運(yùn)的能力,本研究構(gòu)建了sMdCAX1植物超表達(dá)載體并將其通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)入長富6號蘋果中。根據(jù)MdCAX1基因序列設(shè)計引物,從長富6號中克隆MdCAX1基因,通過PCR方法截除編碼MdCAX1基因的N末端序列,獲得sMdCAX1片段。利用重疊PCR方法將sMdCAX1序列中的SacI位點(diǎn)進(jìn)行定點(diǎn)突變,并在序列兩端分別添加BamHI和SacI酶切位點(diǎn),獲得長度為1272bp的突變序列sMd1+2Mu。利用BamHI和SacI雙酶切sMd1+2Mu和植物表達(dá)載體pYH4215,目的片段經(jīng)回收、連接、轉(zhuǎn)化和篩選,獲得植物雙元表達(dá)載體pYH4215-sMd1,并將該載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌菌株EHA105。以長富6號無菌試管苗葉片為受體,進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化獲得了轉(zhuǎn)基因植株,經(jīng)鑒定,有6個株系呈GUS染色陽性,其中2個株系呈PCR陽性。進(jìn)一步對PCR鑒定陽性的株系進(jìn)行RT-PCR分析,表明sMdCAX1基因在這2個株系中得到表達(dá)。本試驗結(jié)果為進(jìn)一步研究蘋果MdCAX1基因的功能和通過轉(zhuǎn)基因方法提高蘋果果實(shí)鈣含量奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院/果樹生物技術(shù)實(shí)驗室;
【關(guān)鍵詞】： 蘋果 s Md CAX基因 植物超表達(dá)載體 遺傳轉(zhuǎn)化
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(31171935) 江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新項目[CX(15)1022] 中央高�；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項基金(KYZ201310)
【分類號】：S661.1
【正文快照】： 蘋果(Malus domestica Borkh.)是我國主要的經(jīng)濟(jì)水果之一,近年來環(huán)境污染以及土壤重金屬化不斷加重,使得蘋果Ca2+流失增加,生理代謝紊亂,產(chǎn)量和品質(zhì)不同程度的降低[1]。缺鈣常常引起蘋果果實(shí)果銹加重、痘斑病、苦痘病、水心病和貯藏期生理性病害等,因此提高蘋果對Ca2+吸收及轉(zhuǎn)

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2 許冬倩;番茄DR1基因植物超表達(dá)載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)化番茄的研究[D];西南農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

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本文編號：688739