本文關(guān)鍵詞：茶樹CsSMT基因的克隆、原核表達(dá)及植物超表達(dá)載體構(gòu)建

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【摘要】：為了發(fā)掘利用茶樹(Camellia sinensis)富硒關(guān)鍵酶硒代半胱氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(Selenocysteine methyltransferase,SMT)基因Cs SMT,基于寧州2號轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果,通過RACE克隆該基因的c DNA全長,并通過原核表達(dá)和蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)驗證該基因,然后構(gòu)建超表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化至根癌農(nóng)桿菌。結(jié)果表明:該基因c DNA全長為1277 bp,開放閱讀框(Open reading frame,ORF)為1 050 bp,與NCBI公布的茶樹該基因ORF序列有8個點突變,且缺少GTCGTC序列。Cs SMT基因編碼349個氨基酸,其氨基酸序列與毛果楊、野生大豆、黃芪的SMT以及川桑的同型半胱氨酸-S-甲基轉(zhuǎn)移酶2(Homocysteine-S-methyltransferase 2,HMT2)的氨基酸序列有較高的相似性。目標(biāo)蛋白分子量約38 k Da,為水溶性蛋白,與預(yù)測結(jié)果相符。成功構(gòu)建Cs SMT基因的超表達(dá)載體,并獲得攜帶Cs SMT的農(nóng)桿菌菌株。
【作者單位】： 貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所;
【關(guān)鍵詞】： 茶樹 硒 Cs SMT 原核表達(dá) 超表達(dá)
【基金】：貴州省農(nóng)業(yè)科學(xué)院研究生科研創(chuàng)新基金項目“茶樹富硒作用關(guān)鍵酶基因CsSMT的克隆與超表達(dá)研究”[黔農(nóng)科合(創(chuàng)新基金)2011006] 貴州省體改項目“現(xiàn)代高效農(nóng)業(yè)園區(qū)茶葉栽培與加工技術(shù)集成示范”[黔科合Z字[2013]4008] 貴州省農(nóng)業(yè)攻關(guān)項目“貴定鳥王茶種質(zhì)資源的保護及開發(fā)利用”[黔科合NY字[2011]3046] 貴州省農(nóng)業(yè)動植物育種專項“黔茶1號區(qū)域適應(yīng)性高效栽培研究與示范”[黔農(nóng)育專字(2012)022號],“貴定鳥王種擴繁和栽培技術(shù)集成與示范”[黔農(nóng)育專字(2015)003]
【分類號】：S571.1
【正文快照】： 號區(qū)域適應(yīng)性高效栽培研究與示范”[黔農(nóng)育專字(2012)022號],“貴定鳥王種擴繁和栽培技術(shù)集成與示范”[黔農(nóng)育專字(2015)003]硒是人體必需的微量元素,對人體具有抗氧化、抗克山病、抗節(jié)骨病、抗心臟病、抗甲狀腺機能減退及抗癌等保健功能[1]。雖未證明硒是植物的必須營養(yǎng)元素,

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