本文關(guān)鍵詞：枳抗逆基因的克隆及功能鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《華中農(nóng)業(yè)大學(xué)》 2006年

枳PPF-1同源基因的克隆及表達(dá)特性分析

羅海瀾  

【摘要】： 柑橘是我國(guó)的主栽果樹(shù)之一。以枳(Poncirus trifoliata(L．)Raf．)為遺傳資源培育抗性柑橘新種質(zhì)是柑橘育種的主要內(nèi)容之一。PPF-1是與開(kāi)花、衰老及逆境有關(guān)的基因，本研究克隆了枳PPF-1同源基因PtPPF-1，并對(duì)其表達(dá)特性進(jìn)行了分析。主要結(jié)果如下： 根據(jù)豌豆PPF-1、擬南芥ALBINO3的cDNA全長(zhǎng)序列比對(duì)結(jié)果設(shè)計(jì)引物，通過(guò)RT-PCR及3′-RACE擴(kuò)增得到了枳PPF-1同源基因的cDNA克隆片段(命名PtPPF-1)，該基因全長(zhǎng)1493bp，編碼一條長(zhǎng)452個(gè)氨基酸殘基的多肽，理論分子量為125.1kD，等電點(diǎn)為4.92。經(jīng)蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)其含有一個(gè)長(zhǎng)為36個(gè)氨基酸殘基的葉綠體定位信號(hào)域和五個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。氨基酸序列比對(duì)表明，，PtPPF-1與豌豆PPF-1、擬南芥ALBINO3、水稻PPF-1相似性較高，與衣藻ALB3.2、性原細(xì)胞ALB3-1、綠領(lǐng)鞭藻類(lèi)ALBINO3等同源蛋白相似性相對(duì)較低。 系統(tǒng)發(fā)育分析表明，PtPPF-1與豌豆PPF-1親緣關(guān)系最近，其次為擬南芥ALBINO3和水稻PPF-1，四者同屬一小族，說(shuō)明PPF-1基因在進(jìn)化過(guò)程中可能變異較小。 采用半定量RT-PCR對(duì)PtPPF-1的表達(dá)特性進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，PtPPF-1的表達(dá)量在枳葉片中最高，頂芽中次之，再次為莖，在根中沒(méi)有檢測(cè)到表達(dá)；而其紅橘(Citrus tangerine Hort．ex Tanaka)的PPF-1同源基因在頂芽、葉片和莖中的表達(dá)沒(méi)有差別。說(shuō)明PtPPF-1的表達(dá)不僅具有組織特異性，而且種屬間也存在差異。這可能與PtPPF-1基因含有葉綠體定位信號(hào)肽有關(guān)及枳抗性有關(guān)。 對(duì)不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理枳葉中PtPPF-1表達(dá)情況進(jìn)行了分析，結(jié)果表明GA_3、IAA、ABA促進(jìn)了PtPPF-1的表達(dá)，KT對(duì)PtPPF-1的表達(dá)有抑制作用。推測(cè)GA_3、IAA、ABA信號(hào)通路可能與KT信號(hào)通路作用于PtPPF-1的表達(dá)存在不同的機(jī)制。PtPPF-1可能作為植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑信號(hào)因子的一個(gè)下游信號(hào)元件存在，參與信號(hào)傳導(dǎo)。 采用半定量RT-PCR對(duì)非生物脅迫(低溫、干旱、鹽)下枳的生理指標(biāo)及PtPPF-1的表達(dá)情況進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，這三種脅迫都能誘導(dǎo)PtPPF-1的表達(dá)。說(shuō)明PtPPF-1基因能響應(yīng)這三種脅迫。SOD、POD活性在三種脅迫中均較高，CAT活性在三種脅迫中處于低水平；脯氨酸含量在三種脅迫中均表現(xiàn)為持續(xù)上升。三種脅迫中尤其是低溫脅迫SOD、POD活性及脯氨酸含量的變化趨勢(shì)與PtPPF-1的表達(dá)有很大的相似性，推測(cè)PtPPF-1基因可能與SOD、POD及脯氨酸之間存在一定的聯(lián)系，并可以作為逆境脅迫標(biāo)志物。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類(lèi)號(hào)】：S666
【目錄】：

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