本文關鍵詞：沙門菌sopB基因缺失株的構(gòu)建及其對巨噬細胞炎性體活化的影響

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【摘要】：沙門菌是一種革蘭氏陰性兼性細胞內(nèi)的細菌病原體,具有廣泛的宿主譜,在全球范圍內(nèi)感染病例中均表現(xiàn)出有較高的發(fā)病率和死亡率。沙門菌的致病性主要依賴于其侵襲細胞及在細胞內(nèi)生存的能力。而這又依賴于其兩個毒力島SPI-1及SPI-2編碼的兩個III型分泌系統(tǒng)(T3SS)。T3SS具有分泌和轉(zhuǎn)導多種細菌毒力因子進入宿主細胞的功能。Sop B是SPI-1重要的分泌毒力因子,具有肌醇磷酸酶活性,在沙門菌侵入過程中可誘導多種磷酸肌醇的去磷酸化作用。Sop B已經(jīng)被證明在侵染過程中影響多種細胞通路,包括細胞膜褶皺形成及抑制SCV與溶酶體的融合等。目前,對于Sop B功能的研究主要關注于其在沙門菌侵染及胞內(nèi)存活過程中的作用。雖然有研究表明Sop B能夠影響多種對炎性反應有調(diào)控作用的細胞信號通路,但Sop B是否影響炎性反應的報道仍不多見。炎性體是天然免疫系統(tǒng)的重要組成部分。炎性體是一種多蛋白復合體,在感染或應激條件下,促進促炎細胞因子成熟釋放。炎性體組成包括:受體,接頭蛋白及效應因子caspase-1。PRRs,包括NLR家族及ALR家族等都能啟動炎性體的組裝。活化的NLR或ALR促進ASC的聚集,而ASC的聚集招募caspase-1進入ASC斑點,啟動caspase-1的自溶性活化,從而誘導的IL-1β及IL-18的蛋白水解過程。作為宿主重要的防御機制,炎性體的活化受到多種因素的嚴格調(diào)控,例如:受體的自抑制及修飾作用。病原同樣可以利用毒力因子抑制炎性體功能,從而達到免疫逃逸的目的。既然,Sop B蛋白在沙門菌侵染及維持胞內(nèi)存活都具有重要的作用,其是否影響沙門菌誘導的炎性體活化。因此,本研究利用λRed重組系統(tǒng)對沙門菌SL1344進行Sop B編碼基因的敲除,并以低拷貝的p STV28為表達載體分別構(gòu)建了全長sop B基因回補質(zhì)粒及sop B突變回補質(zhì)粒。隨后,將回補質(zhì)粒電轉(zhuǎn)至△Sop B菌株中,由此成功獲得三株重組菌株,包括△Sop B::Vect,△Sop B::Sop B及△Sop B::C460S。炎性體活化試驗中,為了探究Sop B蛋白是否影響沙門菌誘導的炎性體。應用ELISA方法檢測Sop B對沙門菌誘導的IL-1β進行測定,LDH的釋放分析細胞死亡,并應用Western blot分析caspase-1、IL-1β、AKT的活化情況及ASC寡聚化水平。免疫熒光分析ASC斑點形成水平等。結(jié)果顯示沙門菌毒力因子Sop B通過誘導AKT信號活化顯著抑制沙門菌誘導的炎性體活化。
【關鍵詞】：沙門菌 SopB 炎性體 AKT信號 抑制
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S852.61
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-12
• 前言12-13
• 第一篇 文獻綜述13-29
• 第一章 炎性體的研究進展13-25
• 1.1 炎性體13-14
• 1.2 炎性體活化14-16
• 1.3 炎性體的信號調(diào)節(jié)16-24
• 1.4 小結(jié)24-25
• 第二章 沙門菌及毒力因子SopB25-29
• 2.1 沙門菌25-26
• 2.2 沙門菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)及效應因子26-27
• 2.3 毒力因子SopB27-28
• 2.4 小結(jié)28-29
• 第二篇 研究內(nèi)容29-61
• 第一章 鼠傷寒沙門菌sopB基因敲除株及回補株的構(gòu)建29-41
• 1.1 材料與方法29-36
• 1.2 實驗結(jié)果36-40
• 1.3 討論40
• 1.4 小結(jié)40-41
• 第二章 沙門菌毒力因子SopB抑制沙門菌誘導的炎性體活化41-61
• 2.1 材料與方法41-54
• 2.2 結(jié)果54-58
• 2.3 討論58-60
• 2.4 小結(jié)60-61
• 結(jié)論61-62
• 參考文獻62-77
• 導師簡介77-78
• 作者簡介78-79
• 致謝79

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1 宋佩p，

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