發(fā)布時(shí)間：2017-08-05 00:00

  本文關(guān)鍵詞：羊口瘡病毒B2L基因的原核表達(dá)、純化及反應(yīng)原性分析

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【摘要】：【目的】克隆和表達(dá)羊口瘡病毒(ORFV)的B2L基因,進(jìn)而純化并分析其反應(yīng)原性.【方法】根據(jù)GenBank已發(fā)表的ORFV(GQ328006)的B2L基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)特異引物,以提取陽(yáng)性臨床樣品的總DNA為模板,通過(guò)PCR方法獲得ORFV的B2L基因,將該基因片段連接至原核表達(dá)載體pET-30a(+)上,獲得重組質(zhì)粒pET-30a(+)-B2L.將此重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞,挑取單克隆進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)獲得重組融合蛋白.用SDS-PAGE和Western-blotting對(duì)表達(dá)的目的蛋白進(jìn)行分析.【結(jié)果】成功獲得重組質(zhì)粒pET-30a(+)-B2L,讀碼框正確.獲得了43ku的表達(dá)產(chǎn)物,與預(yù)期目的蛋白大小相符;純化后的目的蛋白能與ORFV陽(yáng)性血清發(fā)生特異反應(yīng).【結(jié)論】成功對(duì)ORFV-B2L蛋白進(jìn)行了原核表達(dá),且純化后蛋白具有良好的反應(yīng)原性.
【作者單位】： 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院;中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所家畜疫病病原生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室國(guó)家口蹄疫參考實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 羊口瘡病毒 BL基因 原核表達(dá) 純化 反應(yīng)原性分析
【基金】：國(guó)家“863”計(jì)劃項(xiàng)目(2011AA10A211-1) 國(guó)際原子能機(jī)構(gòu)項(xiàng)目(16025/R) 國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31500617)
【分類號(hào)】：S852.65
【正文快照】： 羊口瘡病毒(orf virus,ORFV)即羊傳染性膿瘡病毒(ecthyma contagiosum virus),是痘病毒科(Poxviridae)脊椎動(dòng)物痘病毒亞科(Chordopoxviri-nae)副痘病毒屬(Parapoxvirus)成員[1].副痘病毒屬是一類引發(fā)動(dòng)物上皮組織發(fā)生病變的相關(guān)病毒,可感染綿羊、山羊、駱駝、紅鹿、糜、松鼠、

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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10 張立強(qiáng);羊口瘡病原分子流行病學(xué)調(diào)查及蜂膠佐劑滅活疫苗免疫效果研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：622268