本文關(guān)鍵詞：apoE修飾陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)HSV-tk基因?qū)Ω伟┘?xì)胞的殺傷作用研究

  更多相關(guān)文章： 肝細(xì)胞癌 apo E脂質(zhì)體 survivin啟動(dòng)子 HSVtk基因

【摘要】：目的:1.檢測本實(shí)驗(yàn)室合成的基因載體apo E修飾脂質(zhì)體(apo E-lipoplex)對(duì)肝(癌)細(xì)胞的結(jié)合特異性。2.構(gòu)建包含自殺基因HSVtk的質(zhì)粒pSurvivin-TK-PBI-CMV2,用apo E-lipoplex轉(zhuǎn)染其進(jìn)入肝(癌)細(xì)胞,檢測HSVtk基因在細(xì)胞中的表達(dá)情況。3.檢測apo E-lipoplex/HSVtk/GCV系統(tǒng)對(duì)肝癌細(xì)胞的靶向殺傷作用。方法:1.用apoE-lipoplex攜帶pGenesil-1質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞HepG2、Huh-7和正常肝細(xì)胞HL-7702,宮頸癌細(xì)胞Hela,流式細(xì)胞儀檢測轉(zhuǎn)染率。2.用apoE-lipoplex攜帶pSurvivin-TK-PBI-CMV2質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞HepG2、Huh-7和肝細(xì)胞HL-7702,RT-PCR檢測HSVtk基因的mRNA表達(dá)水平,western blot檢測HSVtk蛋白表達(dá)。3.apoE-lipoplex攜帶pSurvivin-TK-PBI-CMV2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞HepG2、Huh-7和肝細(xì)胞HL-7702,加入前體藥物更昔洛韋(GCV)。2 d后流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率;MTT法檢測細(xì)胞增殖;Hoechst染色后熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化。結(jié)果:1.apo E-lipoplex對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2、Huh-7和肝細(xì)胞HL-7702的轉(zhuǎn)染率相比宮頸癌細(xì)胞Hela更高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.apoE-lipoplex攜帶pSurvivin-TK-PBI-CMV2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞HepG2、Huh-7和肝細(xì)胞HL-7702后,HSVtk基因的mRNA和蛋白在兩種肝癌細(xì)胞中均有明顯表達(dá),但在肝細(xì)胞HL-7702中均未檢測到表達(dá)。3.流式結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染組肝癌細(xì)胞HepG2、Huh-7凋亡顯著(P0.05);MTT結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染組肝癌細(xì)胞HepG2、Huh-7增殖減弱顯著(P0.05);熒光顯微鏡下觀察,轉(zhuǎn)染組肝癌細(xì)胞有凋亡的特征性形態(tài)學(xué)改變。結(jié)論:1.apo E-lipoplex對(duì)肝(癌)細(xì)胞具有較高的轉(zhuǎn)染率,有靶向性轉(zhuǎn)染肝(癌)細(xì)胞的能力。2.相比肝細(xì)胞HL-7702,apo E-lipoplex介導(dǎo)的survivin啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的HSVtk基因在肝癌細(xì)胞HepG2、Huh-7中有特異性表達(dá)。3.apo E-lipoplex介導(dǎo)的pSurvivin-TK-PBI-CMV2質(zhì)粒+GCV系統(tǒng),對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2、Huh-7有選擇性殺傷作用,而對(duì)肝細(xì)胞HL-7702未見明顯殺傷作用。本課題為國家自然科學(xué)基金“乳糜微粒定向介導(dǎo)TK基因載體系統(tǒng)對(duì)肝癌殺傷作用(編號(hào):81172136)”。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞癌 apo E脂質(zhì)體 survivin啟動(dòng)子 HSVtk基因
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R735.7
【目錄】：

• 摘要6-8
• abstract8-10
• 中英文縮略詞對(duì)照表10-12
• 前言12-14
• 1 實(shí)驗(yàn)材料和儀器14-21
• 1.1 細(xì)胞株14
• 1.2 菌株及質(zhì)粒14
• 1.3 主要試劑14-16
• 1.4 實(shí)驗(yàn)器材16-17
• 1.5 試劑配制17-21
• 2 實(shí)驗(yàn)方法21-33
• 2.1 質(zhì)粒準(zhǔn)備21-24
• 2.2 包裹及穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)24-25
• 2.3 細(xì)胞培養(yǎng)25-26
• 2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染率測定26
• 2.5 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞內(nèi)HSV-tk基因檢測26-28
• 2.6 轉(zhuǎn)染后細(xì)胞內(nèi)HSV-tk蛋白檢測28-30
• 2.7 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡情況30-31
• 2.8 Hoechst染色檢測細(xì)胞形態(tài)變化31-32
• 2.9 MTT檢測細(xì)胞增殖32
• 2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析32-33
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-47
• 3.1 質(zhì)粒驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)33-35
• 3.2 脂質(zhì)體檢測實(shí)驗(yàn)35-36
• 3.3 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)36-47
• 4 討論47-49
• 5 結(jié)論49-50
• 參考文獻(xiàn)50-53
• 綜述53-66
• 參考文獻(xiàn)60-66
• 致謝66-67
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果67-68
• 個(gè)人簡歷68

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本文編號(hào)：553902