本文關(guān)鍵詞：中間錦雞兒黃酮合成相關(guān)基因的克隆和功能鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：黃酮類(lèi)化合物是一類(lèi)天然的次生代謝產(chǎn)物,具有抗氧化,防治骨質(zhì)疏松,抗腫瘤等作用,現(xiàn)已得到廣泛的研究。本研究通過(guò)RT-PCR以及RACE技術(shù)從中間錦雞兒中克隆到了兩個(gè)黃酮類(lèi)化合物合成途徑上的基因,分別是CiCHI(查爾酮異構(gòu)酶)和CiFLS(黃酮醇合成酶),并構(gòu)建了兩個(gè)基因的植物表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化野生型擬南芥,結(jié)果如下：1、中間錦雞兒CiCHI基因cDNA全長(zhǎng)1005bp,ORF為678bp(111bp-788bp),5'-UTR長(zhǎng)110bp,3'-UTR長(zhǎng)217bp,編碼226個(gè)氨基酸,推測(cè)的分子量為24.413KD,理論等電點(diǎn)為5.66,是一種穩(wěn)定的兩性蛋白；CiFL S基因全長(zhǎng)為1844bp,ORF為 1020bp(568bp-1587bp),5'-UTR為567bp,3'-UTR為257bp,編碼340個(gè)氨基酸,推測(cè)的分子量為38.765KD,是一種不穩(wěn)定的疏水蛋白,理論等電點(diǎn)為6.01。2、利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)了不同處理下中間錦雞兒幼苗中這兩個(gè)基因的表達(dá)情況以及二者在不同組織部位的表達(dá)情況。CiCHI基因受到紫外、NaCl的誘導(dǎo),表達(dá)趨勢(shì)是先上升后下降,而ABA處理后其表達(dá)是受到抑制的；CiFLS基因?qū)@三種處理均沒(méi)有響應(yīng)。二者在中間錦雞兒幼苗中表達(dá)最高的部位是葉,表達(dá)最低的部位是根。3、構(gòu)建過(guò)表達(dá)載體p35S::CiCHI和p35S::CiFLS,并轉(zhuǎn)化野生型擬南芥,得到純合體株系。4、檢測(cè)過(guò)表達(dá)植株當(dāng)中總黃酮和花青素含量。過(guò)表達(dá)CiCHI基因的擬南芥中總黃酮含量高于野生型擬南芥,而花青素含量變化不大；過(guò)表達(dá)CiFLS基因的擬南芥體內(nèi)的總黃酮及花青素含量沒(méi)有明顯變化。
【關(guān)鍵詞】：中間錦雞兒 CiCHI CiFLS 克隆 黃酮 花青素
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：Q943.2
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 縮略詞表8-9
• 1 引言9-18
• 1.1 黃酮類(lèi)化合物的基本概況9-10
• 1.1.1 黃酮類(lèi)化合物的結(jié)構(gòu)與分類(lèi)9
• 1.1.2 黃酮類(lèi)化合物的功能9-10
• 1.2 黃酮類(lèi)化合物的合成路徑10-11
• 1.3 查爾酮異構(gòu)酶11-15
• 1.3.1 查爾酮異構(gòu)酶的分離與分類(lèi)11-12
• 1.3.2 CHI蛋白的結(jié)構(gòu)與作用機(jī)制12-13
• 1.3.3 CHI基因的表達(dá)特性13-14
• 1.3.4 CHI的系統(tǒng)進(jìn)化14
• 1.3.5 CHI轉(zhuǎn)基因的應(yīng)用14-15
• 1.4 黃酮醇合成酶15-17
• 1.4.1 黃酮醇合成酶的功能與分離15-16
• 1.4.2 FLS在植物中的表達(dá)及調(diào)控16
• 1.4.3 FLS轉(zhuǎn)基因的應(yīng)用16-17
• 1.5 中間錦雞兒的概況17
• 1.6 研究目的及意義17-18
• 2 材料和方法18-27
• 2.1 試驗(yàn)材料18-20
• 2.1.1 植物材料18
• 2.1.2 菌株與質(zhì)粒載體18
• 2.1.3 儀器與試劑18-19
• 2.1.4 引物合成與測(cè)序19-20
• 2.2 試驗(yàn)方法20-27
• 2.2.1 植物材料的培養(yǎng)20
• 2.2.2 培養(yǎng)基的配制20
• 2.2.3 中間錦雞兒和擬南芥RNA提取及cDNA的獲得20-21
• 2.2.4 感受態(tài)的制備和目的片段的轉(zhuǎn)化21
• 2.2.5 質(zhì)粒的提取及純化21
• 2.2.6 目的片段的克隆21-23
• 2.2.7 目的片段的生物信息學(xué)分析23
• 2.2.8 不同脅迫處理下以及不同部位基因表達(dá)量的分析23
• 2.2.9 植物表達(dá)載體的構(gòu)建23-24
• 2.2.10 擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化24
• 2.2.11 轉(zhuǎn)基因植株的篩選24
• 2.2.12 純合體植株CiCHI與CiFLS基因轉(zhuǎn)錄水平的檢測(cè)24-25
• 2.2.13 純合體植株CiCHI與CiFLS蛋白的檢測(cè)(Western Blot)25
• 2.2.14 純合體植株體內(nèi)黃酮類(lèi)化合物及花青素含量的檢測(cè)25-27
• 3 結(jié)果與分析27-40
• 3.1 中間錦雞兒總RNA的提取27
• 3.2 中間錦雞兒CiCHI和CiFLS基因全長(zhǎng)序列的獲得27-29
• 3.2.1 CiCHI基因的保守片段克隆以及3’RACE和5’RACE27-28
• 3.2.2 CiFLS基因的3’RACE和5’RACE28
• 3.2.3 CiCHI和CiFLS基因cDNA的克隆結(jié)果及序列分析28-29
• 3.3 中間錦雞兒CiCHI和CiFLS基因的生物信息學(xué)分析29-32
• 3.3.1 氨基酸序列分析及蛋白理化性質(zhì)29-30
• 3.3.2 系統(tǒng)進(jìn)化分析30-32
• 3.4 CiCHI與CiFLS基因?qū)Σ煌幚淼捻憫?yīng)及在不同部位的表達(dá)32-34
• 3.4.1 CiCHI與CiFLS基因?qū)V-C處理的響應(yīng)32
• 3.4.2 CiCHI與CiFLS基因?qū)aCl處理的響應(yīng)32-33
• 3.4.3 CiCHI與CiFLS基因?qū)BA處理的響應(yīng)33-34
• 3.4.4 CiCHI與CiFLS基因在不同部位的表達(dá)34
• 3.5 篩選CiCHI和CiFLS轉(zhuǎn)基因純合體植株34-37
• 3.5.1 CiCHI和CiFLS基因的過(guò)表達(dá)載體構(gòu)建34-35
• 3.5.2 轉(zhuǎn)基因植株的篩選35-36
• 3.5.3 轉(zhuǎn)基因純合體植株轉(zhuǎn)錄水平的qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果36-37
• 3.5.4 轉(zhuǎn)基因純合體植株蛋白的檢測(cè)37
• 3.6 轉(zhuǎn)基因純合體植株總黃酮及花青素含量的檢測(cè)37-40
• 3.6.1 過(guò)表達(dá)CiCHI基因的轉(zhuǎn)基因植株體內(nèi)總黃酮及花青素的含量37-39
• 3.6.2 過(guò)表達(dá)CiFLS基因的轉(zhuǎn)基因植株體內(nèi)總黃酮及花青素的含量39-40
• 4 討論與結(jié)論40-42
• 4.1 討論40-41
• 4.1.1 過(guò)表達(dá)CiCHI基因提高植株體內(nèi)總黃酮的含量40
• 4.1.2 過(guò)表達(dá)CiFLS基因未能改變植株體內(nèi)總黃酮及花青素的含量40-41
• 4.2 結(jié)論41-42
• 致謝42-43
• 參考文獻(xiàn)43-50
• 作者簡(jiǎn)介50

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4 滿(mǎn)良;趙玲;張恒;王凡;馬成倉(cāng);;蒙古族草場(chǎng)管理傳統(tǒng)文化在中間錦雞兒群系多樣性保育中的作用[J];天津師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年02期

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6 劉麗穎;賈志清;朱雅娟;魏登賢;楊德福;趙雪彬;;共和盆地中間錦雞兒人工林根系的分布特征[J];中國(guó)沙漠;2012年06期

7 李風(fēng)霞;羅希明;張根發(fā);安利佳;;中間錦雞兒和駱駝刺組織培養(yǎng)一次誘導(dǎo)再生植株[J];中國(guó)草地;1992年04期

8 胡鈉梅;韓素英;梁國(guó)魯;齊力旺;;中間錦雞兒(caranaga intermedia)染色體變異研究[J];生物技術(shù)通報(bào);2009年S1期

9 宋炳煜;梁家才;賀文君;李樹(shù)清;;中間錦雞兒(Caragana intermedia)株叢的水分關(guān)系[J];內(nèi)蒙古大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1991年03期

10 劉海江,郭柯;沙埋對(duì)中間錦雞兒幼苗生長(zhǎng)發(fā)育的影響[J];生態(tài)學(xué)報(bào);2005年10期

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3 金花;羅于洋;王曉棟;朝克圖;;三種檸條開(kāi)花結(jié)實(shí)特性及種子發(fā)育的比較研究[A];2009中國(guó)草原發(fā)展論壇論文集[C];2009年

4 林萍;汪陽(yáng)東;齊力旺;李春秀;史勝青;王建華;張守攻;;中間錦雞兒fad2基因克隆與序列分析[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第九次會(huì)員代表大會(huì)暨青年學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2007年

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6 朱建峰;中間錦雞兒MicroRNA發(fā)現(xiàn)及其目標(biāo)基因鑒定與表達(dá)研究[D];中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院;2013年

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2 包姍姍;內(nèi)蒙古高原小葉錦雞兒與中間錦雞兒遺傳多樣性研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

3 柳琳秀;毛烏素沙地三種植物根系垂直分布研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

4 楊洋;中間錦雞兒兩個(gè)逆境脅迫相關(guān)基因CiDef2和CiDHN3的克隆及表達(dá)分析[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

5 武傼菲;中間錦雞兒miR2118的克隆與功能鑒定及CiDR1與CiDR2基因的表達(dá)研究[D];中國(guó)林業(yè)科學(xué)研究院;2015年

6 趙娜;中間錦雞兒CiPP2C37-like基因的克隆與功能分析[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

7 白潔;中間錦雞兒黃酮合成相關(guān)基因的克隆和功能鑒定[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

8 陳河龍;中間錦雞兒開(kāi)花結(jié)實(shí)習(xí)性及苗期耐鹽性評(píng)價(jià)[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

9 吳葉寧;中間錦雞兒干旱脅迫下的葉片全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)構(gòu)建[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

10 沈河溪;秋水仙素誘導(dǎo)檸條中間錦雞兒（Caragana.intermedia）多倍體的研究[D];西南大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：中間錦雞兒黃酮合成相關(guān)基因的克隆和功能鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號(hào)：440013