生殖細(xì)胞的自我更新及分化過程對于男性不育及生殖細(xì)胞腫瘤的發(fā)生至關(guān)重要,CG8005基因作為果蠅(Drosophila melanogaster)睪丸生殖干細(xì)胞的調(diào)控因子之一,其功能機(jī)制尚不清楚。為了探討CG8005基因在果蠅睪丸生殖細(xì)胞中的生物學(xué)功能,本研究首先通過UAS-gal4系統(tǒng)介導(dǎo)的RNAi途徑,驅(qū)動(dòng)果蠅睪丸生殖細(xì)胞和包囊細(xì)胞中UAS-CG8005 RNAi的表達(dá),觀察后代雄性果蠅的生育能力;其次,通過免疫熒光染色方法檢測對照組和CG8005 RNAi雄性果蠅睪丸中Vasa、IBI、鋅指結(jié)構(gòu)域1蛋白(Zn finger homeodomain 1, Zfh1)、眼缺陷蛋白(eyes absent, Eya)、DE-cad、FasIII以及磷酸化組蛋白H3 (phospho-histone H3, PH3)、TUNEL等表達(dá)模式;最后,使用小干擾RNA (siRNA)在果蠅S2細(xì)胞中將CG8005基因表達(dá)沉默,用PH3檢測對照組和CG8005siRNA組中果蠅S2細(xì)胞增殖能力,TUNEL及流式凋亡檢測技術(shù)分析果蠅S2細(xì)胞凋亡情況;通過熒光定量PCR檢測剪接體亞基的mRNA水平,觀...

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圖3在包囊細(xì)胞中敲低CG8005基因?qū)ι臣?xì)胞及體細(xì)胞的影響

為了探索果蠅睪丸中CG8005基因在包囊細(xì)胞中的功能，本研究利用tj-gal4在包囊細(xì)胞中敲低CG8005基因。免疫熒光結(jié)果顯示，對照組睪丸頂部的中心細(xì)胞被FasIII抗體識(shí)別，而實(shí)驗(yàn)組中FasIII信號(hào)消失，Zfh1和Eya染色結(jié)果顯示不存在CySCs和包囊細(xì)胞(圖3)。....

圖4在包囊細(xì)胞中敲低CG8005基因?qū)ι橙诤象w和細(xì)胞凋亡影響

運(yùn)用UAS-gal4系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)CG8005基因在睪丸中缺失，導(dǎo)致生殖細(xì)胞自我更新和分化異常。本研究進(jìn)一步分析CG8005基因?qū)塖2細(xì)胞存活的影響，利用TUNEL免疫熒光技術(shù)檢測凋亡細(xì)胞，結(jié)果顯示，與對照組相比，siCG8005-2組果蠅S2細(xì)胞中TUNEL陽性細(xì)胞增加(圖6A....

圖5在果蠅S2細(xì)胞中缺失CG8005基因?qū)?xì)胞增殖能力的影響

精子發(fā)生過程中任何障礙最終可能導(dǎo)致男性不育，其中生殖細(xì)胞的功能異常對于男性生育能力尤為重要。并且有證據(jù)顯示，生殖細(xì)胞腫瘤患者在年輕的時(shí)候存在生育相關(guān)問題，提示不育癥可能是生殖細(xì)胞腫瘤發(fā)病的高危因素[17]。圖6在果蠅S2細(xì)胞中缺失CG8005基因?qū)?xì)胞凋亡水平的影響

圖6在果蠅S2細(xì)胞中缺失CG8005基因?qū)?xì)胞凋亡水平的影響

圖5在果蠅S2細(xì)胞中缺失CG8005基因?qū)?xì)胞增殖能力的影響圖7CG8005基因沉默對剪接體亞基表達(dá)水平的影響

本文編號(hào)：3935810