細(xì)粒棘球絳蟲(Echinococcus granulosus)的幼蟲(細(xì)粒棘球蚴)寄生于人和多種動物的內(nèi)臟器官所致的一種嚴(yán)重的人畜共患寄生蟲病被稱為細(xì)粒棘球蚴病。該病呈世界性分布,我國是高發(fā)地區(qū)之一,分布在國內(nèi)23個省、市、自治區(qū),遍布全國368個縣,其中以四川西北部、新疆、青海、西藏牧區(qū)發(fā)病率最高,給我國畜牧業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失,也給人類帶來了許多環(huán)境衛(wèi)生和健康安全問題。本研究擴增出細(xì)粒棘球絳蟲磷酸甘油酸激酶(Eg-PGK)和泛素結(jié)合酶D2(Eg-E2D2)基因,分析其基本特征,為細(xì)粒棘球絳蟲相關(guān)蛋白的研究提供重要的參考數(shù)據(jù)和資料。同時,還克隆、融合表達出細(xì)粒棘球絳蟲脂肪酸結(jié)合蛋白和A31蛋白(EgFABP-EgA31)以及細(xì)粒棘球絳蟲硫氧還蛋白過氧化物酶和原肌球蛋白(EgTPx-EgTrp),免疫犬后評價其免疫保護效果。一、細(xì)粒棘球絳蟲磷酸甘油酸激酶基因的克隆、表達及特征分析本研究對Eg-PGK進行了克隆和原核表達,結(jié)果顯示Eg-PGK大小為1248 bp,編碼了415個氨基酸。免疫印跡實驗顯示rEg-PGK具有反應(yīng)原性。用間接免疫熒光定位方法對Eg-PGK進行定位分析,發(fā)現(xiàn)Eg...

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【學(xué)位級別】：碩士

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圖1Eg-PGKPCR擴增M：DNA分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)MakerⅢ；1：PCR產(chǎn)物Figure1PCRamplificationofEg-PGK

19圖1Eg-PGKPCR擴增M：DNA分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)MakerⅢ；1：PCR產(chǎn)物Figure1PCRamplificationofEg-PGKM:DNAmakerMakerⅢ;Lane1:Eg-PGK3.1.2Eg-PGK基因的生物信息學(xué)分析擴增出的細(xì)粒棘球絳蟲Eg-PGK基因長....

圖2Eg-PGK氨基酸序列比對分析

21圖2Eg-PGK氨基酸序列比對分析序列號：EchinococcusgranulosusPGK(GenBank:XP_024350594.1)；EchinococcusmultilocularisPGK(GenBank:CDS42716.1);Hymenolepismicros....

圖3Eg-PGK基因系統(tǒng)進化樹（ML樹）

22紅色三角形：催化位點。Figure2SequencealinmentofEg-PGKResiduesinvolvedinthesubstratebindingsiteareindicatedwithwhitetriangles,thoseinvolvedinhingeregi....

圖4不同IPTG濃度對重組蛋白Eg-PGK表達的影響

233.2rEg-PGK的表達與反應(yīng)原性分析3.2.1IPTG濃度的優(yōu)化將pET32a-Eg-PGK重組菌在IPTG濃度分別為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mmol/L的條件下進行誘導(dǎo)表達，結(jié)果顯示1.2mmol/L的濃度為其最佳濃度（圖4）。圖4不同IPTG濃度....

本文編號：3898617