以神經(jīng)酰胺、鞘磷脂為代表的鞘脂類物質(zhì)不僅是真核生物膜的必要組分之一,它更可作為信號(hào)分子參與眾多細(xì)胞進(jìn)程的調(diào)控過(guò)程。鞘磷脂合酶與鞘磷脂酶是鞘脂類代謝中至關(guān)重要的兩類酶,對(duì)于生物體內(nèi)神經(jīng)酰胺-鞘磷脂的穩(wěn)態(tài)具有重要的調(diào)節(jié)作用。本文以水稻重要害蟲(chóng)褐飛虱作為研究對(duì)象,克隆并鑒定了褐飛虱體內(nèi)鞘磷脂合酶與鞘磷脂酶同源基因,并基于RNA干擾技術(shù),對(duì)兩種酶的生物學(xué)功能進(jìn)行了初步研究。主要研究成果如下:1.在褐飛虱體內(nèi)克隆并鑒定了2個(gè)鞘磷脂合酶同源基因NlSMSL1和NlSMSL2,研究其時(shí)空表達(dá)特性,并驗(yàn)證其體內(nèi)酶活功能。其中NlSMSL1長(zhǎng)1434 bp,編碼477個(gè)氨基酸,在褐飛虱成蟲(chóng)與生殖器官高表達(dá);NlSMSL2長(zhǎng)1188 bp,編碼395個(gè)氨基酸,在褐飛虱成蟲(chóng)與馬氏管高表達(dá)。通過(guò)RNA干擾技術(shù)抑制NlSMSL1表達(dá)后,褐飛虱體內(nèi)神經(jīng)酰胺與鞘磷脂含量無(wú)顯著變化;抑制NlSMSL2表達(dá)后,神經(jīng)酰胺類物質(zhì)總含量極顯著上升,尤其對(duì)d18:0/18:1神經(jīng)酰胺和d18:1/18:0神經(jīng)酰胺影響最顯著。2.通過(guò)顯微注射雙鏈RNA(dsRNA),在褐飛虱體內(nèi)下調(diào)NlSMSL1和NlSMSL2的表達(dá),發(fā)現(xiàn)Nl...

【文章頁(yè)數(shù)】：95 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 水稻及其重要害蟲(chóng)褐飛虱的研究概述
    1.2 鞘脂類物質(zhì)的功能作用
        1.2.1 神經(jīng)酰胺
        1.2.2 鞘磷脂
    1.3 鞘磷脂合酶家族的研究概述
        1.3.1 鞘磷脂合酶家族的發(fā)現(xiàn)
        1.3.2 鞘磷脂合酶的結(jié)構(gòu)與功能
        1.3.3 鞘磷脂合酶相關(guān)蛋白
    1.4 鞘磷脂酶的研究概述
        1.4.1 酸性鞘磷脂酶
        1.4.2 中性鞘磷脂酶
        1.4.3 堿性鞘磷脂酶
    1.5 研究目的與意義
第二章 褐飛虱鞘磷脂合酶家族同源基因NlSMSL1和NlSMSL2 的發(fā)掘
    2.1 材料與方法
        2.1.1 供試?yán)ハx(chóng)與水稻
        2.1.2 試劑與儀器
        2.1.3 NlSMSL1和NlSMSL2 的克隆、分析與時(shí)空表達(dá)
        2.1.4 NlSMSL1和NlSMSL2 基因dsRNA的合成
        2.1.5 顯微注射法與基因干擾效率檢測(cè)
        2.1.6 褐飛虱體內(nèi)神經(jīng)酰胺與鞘磷脂含量測(cè)定
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 NlSMSL1和NlSMSL2 的克隆與鑒定
        2.2.2 NlSMSL1和NlSMSL2 的時(shí)空表達(dá)
        2.2.3 NlSMSL1和NlSMSL2的RNA干擾效率
        2.2.4 NlSMSL1和NlSMSL2 對(duì)褐飛虱神經(jīng)酰胺與鞘磷脂含量的影響
    2.3 討論
第三章 NlSMSL1和NlSMSL2 在褐飛虱生長(zhǎng)生殖過(guò)程中的作用
    3.1 材料與方法
        3.1.1 供試?yán)ハx(chóng)與水稻
        3.1.2 試劑與儀器
        3.1.3 各生物學(xué)測(cè)定實(shí)驗(yàn)方法
        3.1.4 qRT-PCR法對(duì)卵黃原蛋白相關(guān)基因的檢測(cè)
        3.1.5 褐飛虱體內(nèi)游離脂肪酸含量的測(cè)定
        3.1.6 Western Blot法對(duì)褐飛虱卵黃原蛋白的檢測(cè)
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 NlSMSL1和NlSMSL2 對(duì)褐飛虱若蟲(chóng)、雌成蟲(chóng)存活率的影響
        3.2.2 NlSMSL1和NlSMSL2 對(duì)褐飛虱成蟲(chóng)體重的影響
        3.2.3 NlSMSL1和NlSMSL2 對(duì)褐飛虱雌蟲(chóng)體內(nèi)游離脂肪酸的影響
        3.2.4 NlSMSL1和NlSMSL2 對(duì)褐飛虱產(chǎn)卵量、孵化率的影響
        3.2.5 NlSMSL1和NlSMSL2 對(duì)褐飛虱生殖器官發(fā)育的影響
        3.2.6 NlSMSL1 對(duì)褐飛虱體內(nèi)卵數(shù)與卵黃原蛋白的影響
    3.3 討論
第四章 褐飛虱鞘磷脂酶同源基因的初步研究
    4.1 材料與方法
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 褐飛虱鞘磷脂酶同源基因的克隆與鑒定
        4.2.2 NlSMase1⁴ 的時(shí)空表達(dá)
        4.2.3 NlSMase1⁴的RNA干擾效率
        4.2.4 NlSMase1⁴ 對(duì)褐飛虱雌蟲(chóng)卵巢發(fā)育的影響
        4.2.5 NlSMase4 對(duì)褐飛虱雌蟲(chóng)卵巢轉(zhuǎn)錄組的影響
    4.3 討論
第五章 總結(jié)與展望
    5.1 研究總結(jié)
    5.2 本研究的創(chuàng)新之處
    5.3 未來(lái)研究展望
參考文獻(xiàn)
附錄1



本文編號(hào)：3872963