發(fā)布時(shí)間：2023-11-26 14:20

　　無脊椎動(dòng)物先天免疫(Innate immunity)系統(tǒng)是通過機(jī)體內(nèi)的模式識(shí)別受體(Pattern Recognition Receptors,PRRs)識(shí)別入侵病原微生物表面的病原相關(guān)分子模式(Pathogen Associated Molecular Patterns,PAMPs)而激活的。而肽聚糖識(shí)別蛋白(Peptidoglycan recognition proteins,PGRPs)是一類在動(dòng)物先天免疫系統(tǒng)中用來識(shí)別肽聚糖(PGN)的蛋白家族,在激活免疫途徑中起重要作用。本研究中我們以家蠅為研究對(duì)象,克隆了家蠅的PGRP-LE基因(MdPGRP-LE),對(duì)家蠅PGRP家族進(jìn)行系統(tǒng)的生物信息學(xué)分析,并從分子水平上對(duì)MdPGRP-LE在家蠅先天免疫中的功能進(jìn)行了研究。研究結(jié)果如下:1.我們篩選到26條MdPGRP基因,包括8條PGRP-L和18條PGRP-S。大多數(shù)PGRP-S都存在信號(hào)肽,除MdPGRP-LB有信號(hào)肽外,其它PGRP-L基因成員均無信號(hào)肽。此外,MdPGRP在家蠅基因組不同Scaffold上呈現(xiàn)不均勻分布。PGRP-L的外顯子數(shù)目普遍多于PGRP-S。2.對(duì)Md...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 前言
    1.1 肽聚糖識(shí)別蛋白(PGRP)的研究進(jìn)展
    1.2 昆蟲的先天免疫系統(tǒng)
        1.2.1 昆蟲的免疫識(shí)別機(jī)制
        1.2.2 果蠅免疫信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑
        1.2.3 PPO(酚氧化酶原)激活途徑
    1.3 研究目的及意義
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)昆蟲
        2.1.2 菌種和載體
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)引物
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 家蠅PGRP家族生物信息學(xué)分析
        2.2.2 家蠅不同組織、發(fā)育階段和細(xì)菌刺激的表達(dá)模式
        2.2.3 家蠅幼蟲干擾效果檢測及干擾后功能分析
        2.2.4 MdPGRP-LE基因的原核表達(dá)及蛋白純化
        2.2.5 rMdPGRP-LE與細(xì)菌結(jié)合活性檢測
        2.2.6 rMdPGRP-LE與 PAMPs結(jié)合活性檢測
        2.2.7 rMdPGRP-LE與細(xì)菌凝集活性檢測
        2.2.8 rMdPGRP-LE與 PGN酰胺酶活性檢測
        2.2.9 rMdPGRP-LE抗菌活性檢測
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    3.1 家蠅PGRP家族生物信息學(xué)分析
        3.1.1 MdPGRP基因家族序列分析
        3.1.2 MdPGRP蛋白家族序列分析
    3.2 MdPGRP-LE基因在不同條件下的表達(dá)模式分析
        3.2.1 MdPGRP-LE基因在家蠅3 齡幼蟲不同組織中的表達(dá)水平
        3.2.2 MdPGRP-LE基因在家蠅不同發(fā)育階段的表達(dá)水平
        3.2.3 MdPGRP-LE基因在不同細(xì)菌刺激下的表達(dá)水平
    3.3 家蠅幼蟲干擾檢測及干擾后功能分析
        3.3.1 MdPGRP-LE基因干擾效果檢測
        3.3.2 MdPGRP-LE基因敲低后家蠅幼蟲腸道中pGFP-ECO的熒光檢測.
        3.3.3 MdPGRP-LE基因敲低對(duì)轉(zhuǎn)錄因子及抗菌肽表達(dá)的影響
        3.3.4 MdPGRP-LE基因敲低后酚氧化物酶活性的測定
        3.3.5 MdPGRP-LE基因敲低并細(xì)菌刺激對(duì)轉(zhuǎn)錄因子及抗菌肽表達(dá)的影響
        3.3.6 MdPGRP-LE基因敲低(并細(xì)菌刺激后)對(duì)家蠅幼蟲存活率的影響
    3.4 MdPGRP-LE基因的原核表達(dá)及蛋白純化
    3.5 rMdPGRP-LE與細(xì)菌結(jié)合活性檢測
    3.6 rMdPGRP-LE與多糖結(jié)合活性檢測
    3.7 rMdPGRP-LE與細(xì)菌凝集活性檢測
    3.8 rMdPGRP-LE酰胺酶活性檢測
    3.9 rMdPGRP-LE抗菌活性檢測
第四章 討論
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間發(fā)表論文情況



本文編號(hào)：3867943