研究以增殖細胞標記物-增殖細胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)蛋白為切入點,采用RACE(Rapid amplification of cDNA ends)方法克隆了大乳頭水螅(Hydra magnipapillata)PCNA基因的cDNA序列。該cDNA序列包含1240 bp,其中837 bp為編碼區(qū),編碼的蛋白質(zhì)預測分子量為30.93 kD。把PCNA基因ORF中的部分序列克隆到原核表達質(zhì)粒pET-28b(+)中,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化E. coli BL21 (DE3)菌株, IPTG誘導后成功表達重組PCNA蛋白,再用該重組蛋白免疫新西蘭兔制備多克隆抗體用于PCNA蛋白的免疫印跡分析(Western blotting assay, WB)。采用實時定量PCR (quantitative Real-time PCR, qPCR)及WB方法檢測水螅頭部再生進程中其PCNA表達水平的動態(tài)變化,結(jié)果表明在再生進程的中后期階段水螅PCNA表達量呈現(xiàn)一定程度的上調(diào)。結(jié)果暗示水螅頭部再生進程的中后期階段其傷口及附近區(qū)域可能存在細胞分裂活動。

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