雞胚在孵化階段依靠外界輸入氧氣參與機體基礎生命代謝以維持機體正常發(fā)育,而后期隨著加劇的胚胎生長會導致活性氧的加速產生,其過量的積累會打破氧化應激平衡,對機體造成干擾和損傷。此時存在于雞胚內部的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)、過氧化物酶(POD)等抗氧化酶會與之結合進而發(fā)生分解反應,以保證發(fā)育過程中的氧化應激平衡。有研究表明,在雞胚整個孵化過程中分散在不同部位的抗氧化酶其種類和活性是持續(xù)變化的,然而對于調控抗氧化酶活性的作用機制尚未清晰,因此挖掘調控抗氧化酶活性的關鍵基因是本研究的主要目的。本課題基于轉錄組測序技術,篩選出雞胚肝臟組織中調控抗氧化功能的差異表達基因,并構建過氧化氫誘導的雞胚肝細胞氧化應激模型,以期探索關鍵基因的調控機理,試驗結果如下所示:1.抗氧化酶活性檢測結果:孵化期處于Day 12到Day 18的雞胚肝臟組織中的SOD酶活和GSH-Px酶活均呈現(xiàn)先降低后增高的趨勢,且Day 12和Day 16雞胚肝臟組織的SOD酶活與GSH-Px酶活顯著差異(p<0.05),因此,將孵化至Day 12和Day 16的雞胚肝臟組織做為下一步轉錄組測序對...

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 雞胚抗氧化功能研究
        1.1.1 雞胚簡介
        1.1.2 氧化應激簡介
        1.1.3 雞胚的抗氧化作用研究現(xiàn)狀
        1.1.4 調控雞胚的抗氧化作用相關基因的研究進展
    1.2 轉錄組測序技術的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 轉錄組測序技術
        1.2.2 測序技術的發(fā)展
        1.2.3 轉錄組測序技術在鑒定重要性狀關鍵基因上的應用
    1.3 本課題研究目的及意義
第二章 雞胚肝臟組織抗氧化酶活性測定
    2.1 引言
    2.2 試驗材料與儀器
        2.2.1 試驗材料
        2.2.2 試驗儀器
    2.3 試驗方法
        2.3.1 試驗材料預處理
        2.3.2 蛋白含量檢測
        2.3.3 超氧化物歧化酶(SOD)檢測
        2.3.4 谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)檢測
    2.4 試驗結果與分析
        2.4.1 蛋白含量檢測
        2.4.2 超氧化物歧化酶活性檢測
        2.4.3 谷胱甘肽過氧化物酶活性檢測
    2.5 本章結論
第三章 基于轉錄組測序技術篩選調控雞胚肝臟組織抗氧化功能差異表達基因
    3.1 引言
    3.2 試驗材料與儀器
        3.2.1 試驗材料
        3.2.2 試驗儀器
    3.3 試驗方法
        3.3.1 肝臟組織總RNA提取
        3.3.2 總RNA質量檢測
        3.3.3 cDNA文庫構建
        3.3.4 轉錄組測序
        3.3.5 熒光定量PCR檢測
    3.4 試驗數(shù)據(jù)分析
        3.4.1 總RNA質量檢測
        3.4.2 測序原始數(shù)據(jù)質量評估
        3.4.3 試驗相關性分析
        3.4.4 基因表達水平分析
        3.4.5 差異表達分析
        3.4.6 差異表達基因富集分析
    3.5 試驗結果與分析
        3.5.1 總RNA提取質量檢測
        3.5.2 轉錄組測序數(shù)據(jù)質量評估
        3.5.3 參考序列比對
        3.5.4 基因表達水平分析
        3.5.5 差異基因表達分析
        3.5.6 差異表達基因富集分析
        3.5.7 差異表達基因驗證
        3.5.8 討論
    3.6 本章結論
第四章 維生素C緩解過氧化氫誘導的雞胚肝細胞氧化應激探究
    4.1 引言
    4.2 試驗材料及儀器
        4.2.1 試驗材料
        4.2.2 試驗儀器
    4.3 試驗方法
        4.3.1 培養(yǎng)板包被
        4.3.2 雞胚肝細胞分離體外培養(yǎng)
        4.3.3 過氧化氫濃度區(qū)間設定檢測
        4.3.4 試驗分組設計
        4.3.5 肝細胞存活率的檢測
        4.3.6 超氧化物歧化酶活檢測
        4.3.7 維生素C對氧化應激的緩解作用
        4.3.8 熒光定量PCR檢測
    4.4 試驗結果與分析
        4.4.1 原代雞胚肝細胞體外培養(yǎng)
        4.4.2 過氧化氫濃度區(qū)間的選擇
        4.4.3 過氧化氫處理對雞胚肝細胞存活率的影響
        4.4.4 過氧化氫對肝細胞超氧化物歧化酶活性的影響
        4.4.5 維生素C的安全濃度的篩選
        4.4.6 雞胚肝細胞的活力變化檢測
        4.4.7 關鍵基因的驗證
    4.5 本章結論
第五章 結論與展望
    5.1 試驗結論
    5.2 展望
參考文獻
攻讀碩士學位期間的學術活動及成果情況



本文編號：3865013