針對(duì)Mindin基因編碼序列設(shè)計(jì)3條單鏈向?qū)NA(sgRNA),制備相應(yīng)質(zhì)粒,將表達(dá)sgRNA和Cas9蛋白的質(zhì)粒共同電轉(zhuǎn)入小鼠成纖維細(xì)胞L929中,通過(guò)藥物篩選獲得細(xì)胞庫(kù).經(jīng)單克隆測(cè)序檢測(cè)細(xì)胞庫(kù)中基因組的突變效率,選擇效率最佳的sgRNA.體外轉(zhuǎn)錄獲取sgRNA和Cas9mRNA,進(jìn)行小鼠受精卵的顯微注射后提取小鼠基因組DNA測(cè)序鑒定.產(chǎn)生的40只小鼠中17只發(fā)生不同程度的堿基插入或缺失,其中23號(hào)小鼠缺失10個(gè)堿基造成移碼突變,Mindin基因表達(dá)被破壞,成功構(gòu)建出Mindin基因敲除小鼠,為深入研究Mindin基因的生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ).

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 主要試劑與儀器
    1.3 實(shí)驗(yàn)方法
2 結(jié)果和分析
    2.1 sgRNA的設(shè)計(jì)和相應(yīng)質(zhì)粒的構(gòu)建
    2.2 sgRNA敲除效率的檢測(cè)
    2.3 利用CRISPR/Cas9制備Mindin基因敲除小鼠
3 討論



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