水稻條斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc)侵染寄主水稻,引起水稻細(xì)菌性條斑病(Bacterial leaf streak,BLS),在亞洲水稻種植區(qū)引起嚴(yán)重減產(chǎn)。Xoc主要依靠hrp基因簇(T3SS基因)編碼的III型分泌系統(tǒng)(type III secretion system,T3SS)將效應(yīng)蛋白運(yùn)送到寄主細(xì)胞中,并激發(fā)水稻的抗(感)性。T3SS作為Xoc關(guān)鍵毒性因子,是Xoc毒性調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的重要組成部分,但尚且缺乏有效解析Xoc毒性調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的誘導(dǎo)表達(dá)體系。為了更好地解析Xoc毒性調(diào)控網(wǎng)絡(luò),本研究建立了一套從轉(zhuǎn)錄水平到蛋白表達(dá)水平的Xoc T3SS誘導(dǎo)表達(dá)檢測體系。為建立T3SS轉(zhuǎn)錄水平報(bào)道檢測體系,本研究利用gusA報(bào)道基因構(gòu)建獲得啟動(dòng)子探針載體pHG2-hrpGxoc、pHG2-hrpXoc、pHG1-hrcCxoc。通過啟動(dòng)子GUS活性測定和熒光定量PCR,初步證明了這套轉(zhuǎn)錄水平報(bào)道檢測體系在XOM3誘導(dǎo)條件下運(yùn)行和解析基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控表達(dá)情況。為進(jìn)一步確定這套體系可以精確分析基因調(diào)控表達(dá),將上述啟動(dòng)子探針載體導(dǎo)入調(diào)控基因trh、zur、l...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 水稻條斑病和水稻條斑病菌
        1.1.1 水稻條斑病的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 水稻條斑病的分布及危害
        1.1.3 水稻條斑病菌
        1.1.4 水稻條斑病的危害及防治方法
    1.2 水稻條斑病菌的毒性因子
        1.2.1 胞外酶類
        1.2.2 胞外多糖
        1.2.3 脂多糖
        1.2.4 Ⅲ型分泌系統(tǒng)和效應(yīng)蛋白
    1.3 水稻條斑病菌毒性調(diào)控網(wǎng)絡(luò)
        1.3.1 群集感應(yīng)系統(tǒng)
        1.3.2 環(huán)鳥苷二磷酸信號(hào)激發(fā)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
        1.3.3 雙組份信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的毒性調(diào)控
        1.3.4 hrp基因表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)
        1.3.5 轉(zhuǎn)錄后的毒性基因調(diào)控
    1.4 T3SS基因表達(dá)檢測體系的研究進(jìn)展
        1.4.1 T3SS基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)檢測體系的研究進(jìn)展
        1.4.2 T3SS基因蛋白表達(dá)檢測體系的研究進(jìn)展
    1.5 研究內(nèi)容和意義
第二章 水稻條斑病菌T3SS基因轉(zhuǎn)錄水平報(bào)道檢測體系的建立
    引言
    2.1 材料與方法
        2.1.1 菌株與質(zhì)粒
        2.1.2 引物設(shè)計(jì)與合成
        2.1.3 培養(yǎng)基
        2.1.4 菌株的活化、培養(yǎng)和保存
        2.1.5 質(zhì)粒的提取
        2.1.6 分子遺傳操作體系
        2.1.7 過渡載體和骨架載體的構(gòu)建
        2.1.8 啟動(dòng)子探針載體的構(gòu)建
        2.1.9 黃單胞菌感受態(tài)制備及電轉(zhuǎn)化
        2.1.10 實(shí)驗(yàn)作物品種與生長條件
        2.1.11 注射接種
        2.1.12 XOM3 誘導(dǎo)條件下的GUS活性定量測定
        2.1.13 植物組織中的GUS染色方法
        2.1.14 植物組織中的GUS活性定量測定方法
        2.1.15 植物組織中細(xì)菌生長量的測定
        2.1.16 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 T3SS基因啟動(dòng)子探針載體的構(gòu)建
        2.2.2 T3SS基因啟動(dòng)子活性的誘導(dǎo)表達(dá)檢測
        2.2.3 啟動(dòng)子探針載體應(yīng)用于基因調(diào)控表達(dá)的分析
        2.2.4 已知毒性調(diào)控子基因調(diào)控T3SS基因表達(dá)的分析
        2.2.5 啟動(dòng)子探針載體應(yīng)用于植物組織中基因表達(dá)調(diào)控的分析
    2.3 討論
第三章 水稻條斑病菌T3SS基因蛋白表達(dá)檢測體系的建立
    引言
    3.1 材料與方法
        3.1.1 菌株與質(zhì)粒
        3.1.2 引物設(shè)計(jì)與合成
        3.1.3 培養(yǎng)基
        3.1.4 菌株的活化、培養(yǎng)和保存
        3.1.5 質(zhì)粒的提取
        3.1.6 分子遺傳操作體系
        3.1.7 過渡載體和骨架載體的構(gòu)建
        3.1.8 蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.1.9 黃單胞菌感受態(tài)制備及電轉(zhuǎn)化
        3.1.10 實(shí)驗(yàn)作物品種與生長條件
        3.1.11 注射接種
        3.1.12 蛋白免疫雜交技術(shù)(Western blot)
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 T3SS基因蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.2 T3SS蛋白表達(dá)檢測體系的建立
        3.2.3 T3SS蛋白表達(dá)檢測體系應(yīng)用于毒性調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的分析
        3.2.4 T3SS蛋白表達(dá)檢測體系應(yīng)用于基因功能互補(bǔ)的分析
    3.3 討論
第四章 全文總結(jié)與展望
    4.1 總結(jié)
    4.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    4.3 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號(hào)：3827723