目的 :研究阻斷磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/絲氨酸-蘇氨酸激酶(seride-threonine protein kinase,又稱Akt)信號(hào)通路對(duì)逆轉(zhuǎn)耐羥基喜樹堿(hydroxycamptothecin,HCPT)人結(jié)腸癌SW1116/HCPT細(xì)胞多藥耐藥性的影響。方法:采用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)親本SW1116細(xì)胞和耐HCPT細(xì)胞株SW1116/HCPT中Akt及磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)蛋白的表達(dá)水平。應(yīng)用針對(duì)PI3K/Akt信號(hào)通路的小分子抑制劑LY294002或siR NA干擾的方法分別抑制或沉默Akt蛋白的表達(dá);MTT法檢測(cè)抑制或沉默Akt蛋白表達(dá)后,HCPT對(duì)SW1116/HCPT細(xì)胞生存率的影響;實(shí)時(shí)熒光定量PCR及蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)對(duì)耐藥轉(zhuǎn)運(yùn)體三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G(2ATP-binding cassette transporter G2,ABCG2)mR NA及蛋白表達(dá)的影響;羅丹明123(rhodamine123,Rh123)法檢測(cè)對(duì)SW1116/HCPT細(xì)胞藥物外排功能的影響。結(jié)...

【文章頁(yè)數(shù)】：11 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細(xì)胞與試劑
    1.2 方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)親本SW1116和耐藥SW1116/HCPT細(xì)胞中Akt及p-Akt的表達(dá)水平
        1.2.3 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染si RNA及有效si RNA的篩選
        1.2.4 抑制或沉默Akt基因表達(dá)對(duì)耐藥SW1116/HCPT細(xì)胞中PI3K/Akt信號(hào)通路活性的影響
        1.2.5 采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的存活率
        1.2.6 抑制或沉默Akt基因表達(dá)對(duì)耐藥相關(guān)基因ABCG2 m RNA表達(dá)的影響
        1.2.7 抑制或沉默Akt基因表達(dá)對(duì)耐藥相關(guān)基因ABCG2蛋白表達(dá)水平的影響
        1.2.8 Rh123藥物外排實(shí)驗(yàn)
        1.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 親本細(xì)胞SW1116和耐藥細(xì)胞SW1116/HCPT中Akt的表達(dá)和活化
    2.2 有效si RNA的篩選
    2.3 LY294002抑制及Akt-si RNA沉默Akt基因表達(dá)對(duì)耐藥SW1116/HCPT細(xì)胞中PI3K/Akt信號(hào)通路活性的影響
    2.4 LY294002抑制及Akt-si RNA沉默Akt基因表達(dá)后SW1116/HCPT細(xì)胞對(duì)HCPT藥物敏感性的改變
    2.5 LY294002抑制及Akt-si RNA沉默Akt基因表達(dá)對(duì)SW1116/HCPT細(xì)胞中ABCG2表達(dá)的影響
    2.6 LY294002抑制及Akt-si RNA沉默Akt基因表達(dá)對(duì)耐藥細(xì)胞ABCG2轉(zhuǎn)運(yùn)功能的影響
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本文編號(hào)：3806773