【目的】ExpiCHO細(xì)胞瞬時(shí)表達(dá)能夠快速有效地生產(chǎn)重組蛋白,為篩選有效的重組蛋白節(jié)省了大量的時(shí)間,細(xì)胞系的選擇、表達(dá)載體的選擇、轉(zhuǎn)染試劑的選擇等是制約ExpiCHO細(xì)胞瞬時(shí)表達(dá)蛋白的重要因素,本研究旨在篩選出在CHO細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá)量較高的載體�！痉椒ā恳訥FP基因作為目的基因,用不同的真核表達(dá)載體構(gòu)建GFP重組質(zhì)粒,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染ExpiCHO-S細(xì)胞。轉(zhuǎn)染后4 d觀察不同載體表達(dá)GFP的熒光數(shù)量和強(qiáng)度;轉(zhuǎn)染后8 d對(duì)細(xì)胞進(jìn)行裂解,收獲裂解上清,用SDS-PAGE對(duì)不同載體的表達(dá)量進(jìn)行鑒定。同時(shí)用His Trap FF親和層析柱對(duì)裂解上清中的GFP蛋白進(jìn)行純化,通過(guò)Western Blot比較不同載體GFP蛋白的表達(dá)量�！窘Y(jié)果】pCDNA3.1-GFP、pCDNA3.4-GFP載體表達(dá)的熒光數(shù)量最多,pCIneo-GFP載體表達(dá)的熒光強(qiáng)度最強(qiáng),pCMVHA載體表達(dá)的熒光數(shù)量最少,熒光強(qiáng)度最弱。SDS-PAGE和Western Blot結(jié)果均表明pCDNA3.1-GFP、pCDNA3.4-GFP、pCIneo-GFP重組質(zhì)粒的蛋白表達(dá)量高于pCHO-GFP、pCMVHA-GFP重組質(zhì)粒的蛋白...

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【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 菌種、質(zhì)粒及細(xì)胞
    1.2 主要試劑
    1.3 GFP片段的擴(kuò)增
    1.4 GFP重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.5 Expi CHO-S細(xì)胞表達(dá)GFP蛋白
    1.6 GFP蛋白的純化
2 結(jié)果與分析
    2.1 GFP重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    2.2 GFP蛋白的表達(dá)
    2.3 GFP蛋白的SDS-PAGE及Western blot鑒定
3 討論



本文編號(hào)：3785082