水葫蘆(Eichhornia crassipes)是一種外來入侵植物,它能夠高效吸收氮和磷,因此在富營養(yǎng)化水體中能夠快速生長。它的瘋長破壞了水體生態(tài)平衡,造成很大經(jīng)濟(jì)損失,但控制種養(yǎng)水葫蘆,又可以利用它來凈化水質(zhì),因此研究水葫蘆磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因(Eichhornia crassipes phosphate transporter,EcPHT),有利于揭示水葫蘆對富營養(yǎng)化水體中磷吸收的分子機(jī)理,揭示水葫蘆快速入侵的分子機(jī)理,為水葫蘆合理開發(fā)和利用提供理論基礎(chǔ)。磷(Phosphorus,P)是植物生長發(fā)育過程中不可缺少的營養(yǎng)元素,是核酸、ATP、磷脂的重要組成之一。研究水葫蘆運(yùn)蛋白基因能夠為高效吸收磷的經(jīng)濟(jì)作物高效磷吸收提供借鑒,能夠為優(yōu)良農(nóng)作物的遺傳育種提供新的基因資源。本文利用二十多種植物的高親和力磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(Phosphate Transporter 1,PHT1)基因保守序列設(shè)計出簡并引物,克隆出水葫蘆EcPHT中間片段710 bp。利用RACE技術(shù),獲得EcPHT基因的5’端和3’端片段,EcPHT基因全長序列通過拼接獲得。EcPHT基因完整的開放閱讀框1572 bp,編碼523個...

【文章頁數(shù)】：114 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 水葫蘆的概況
        1.1.1 水葫蘆的簡介
        1.1.2 水葫蘆研究狀況
    1.2 植物體內(nèi)的磷元素
        1.2.1 磷元素在植物體內(nèi)的生理作用
        1.2.2 植物對磷的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制
    1.3 植物磷轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)蛋白基因的研究進(jìn)展
        1.3.1 植物磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的類型
        1.3.2 植物磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能鑒定
        1.3.3 植物PHT1 家族的研究進(jìn)展
        1.3.4 植物PHR1 家族的研究進(jìn)展
    1.4 研究目的、意義及內(nèi)容
        1.4.1 研究目的和意義
        1.4.2 研究的內(nèi)容
第二章 水葫蘆磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因EcPHT全長的克隆及序列分析
    2.1 引言
    2.2 實驗材料與試劑
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 實驗試劑盒與酶
        2.2.3 化學(xué)試劑
        2.2.4 培養(yǎng)基配方與菌種
        2.2.5 主要實驗儀器
        2.2.6 引物
    2.3 主要實驗方法
        2.3.1 水葫蘆EcPHT中間片段的克隆
        2.3.2 EcPTT基因RACE克隆
        2.3.3 EcPTT基因的全長克隆
        2.3.4 基因序列分析
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 實驗結(jié)果電泳圖
        2.4.2 水葫蘆EcPHT基因序列的分析
    2.5 討論
第三章 水葫蘆EcPHT基因在酵母表達(dá)系統(tǒng)的功能鑒定
    3.1 引言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗菌種與質(zhì)粒
        3.2.2 實驗試劑與試劑盒
        3.2.3 培養(yǎng)基配方
        3.2.4 引物
    3.3 實驗方法
        3.3.1 質(zhì)粒PYES2 的提取
        3.3.2 載體構(gòu)建
        3.3.3 酵母感受態(tài)制備、轉(zhuǎn)化
        3.3.4 酵母中的質(zhì)粒提取
    3.4 實驗結(jié)果與分析
        3.4.1 實驗結(jié)果電泳圖
        3.4.2 酵母功能互補(bǔ)實驗結(jié)果
        3.4.3 不同pH值和時間下酵母菌生長狀況
    3.5 討論
第四章 水葫蘆EcPHT的表達(dá)研究
    4.1 引言
    4.2 實驗材料與方法
        4.2.1 實驗材料
        4.2.2 實驗方法
    4.3 實驗結(jié)果
        4.3.1 Real-time PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線
        4.3.2 EcPHT基因在水葫蘆體內(nèi)的表達(dá)情況
        4.3.3 水葫蘆濕重?zé)o機(jī)磷含量測量
    4.4 討論
第五章 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的水葫蘆EcPHT基因轉(zhuǎn)化煙草
    5.1 引言
    5.2 實驗材料與方法
        5.2.1 實驗材料
        5.2.2 實驗方法
    5.3 實驗結(jié)果與分析
        5.3.1 實驗結(jié)果電泳圖
        5.3.2 煙草生長情況
    5.4 討論
第六章 EcPHT轉(zhuǎn)基因煙草中磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因及相關(guān)基因的表達(dá)研究
    6.1 引言
    6.2 實驗材料與方法
        6.2.1 實驗材料
        6.2.2 實驗方法
    6.3 實驗結(jié)果
        6.3.1 Real-time PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線
        6.3.2 NtPHT、NtPHR、EcPHT基因熒光定量PCR結(jié)果分析
        6.3.3 轉(zhuǎn)基因煙草磷含量的測量
    6.4 討論
結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
致謝
附錄1 EcPHT基因保守序列片段BLAST比對
附錄2 煙草actin序列片段
附錄3



本文編號：3780006