組蛋白分子伴侶FACT可以負(fù)調(diào)控核小體的穩(wěn)定性,從而促進(jìn)染色體基因的轉(zhuǎn)錄。在植物中FACT是由兩個(gè)保守的蛋白質(zhì)亞基SSRP1和SPT16組成的復(fù)合物。SPT16蛋白被報(bào)道影響擬南芥營(yíng)養(yǎng)體的生長(zhǎng)和結(jié)實(shí)率,但是其對(duì)雄性發(fā)育的影響仍未報(bào)道。因此,我們從擬南芥生物資源中心(ABRC)購(gòu)買了編碼該蛋白的SPT16基因的T-DNA插入突變體株系CS805649。初步分析表明,CS805649(spt16)突變體中SPT16基因表達(dá)水平下調(diào),并且突變體的雄性育性下降。進(jìn)一步通過組織切片發(fā)現(xiàn),spt16突變體的花藥發(fā)育異常,其花藥早期內(nèi)層細(xì)胞層和小孢子母細(xì)胞發(fā)育明顯缺陷,并且花粉囊結(jié)構(gòu)完整性也發(fā)生異常。然后,通過亞歷山大染色分析表明,spt16中成熟花粉數(shù)量明顯減少。遺傳分析表明,突變體spt16所導(dǎo)致的雄性不育表型是由于單核基因隱性突變所致。基因克隆分析發(fā)現(xiàn)兩個(gè)T-DNA右臂背靠背位于擬南芥基因組第四條染色體SPT16(At4g10710)基因的啟動(dòng)子區(qū)域。連鎖分析實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明spt16的突變表型與T-DNA插入是緊密連鎖的。這些結(jié)果證明,SPT16基因的突變會(huì)導(dǎo)致雄性發(fā)育缺陷。更進(jìn)一步的mRNA...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 染色質(zhì)與核小體
    1.2 組蛋白分子伴侶
        1.2.1 FACT(FacilitateChromatinTranscription)
    1.3 花藥發(fā)育的基本過程
    1.4 擬南芥花藥早期發(fā)育的調(diào)節(jié)基因
        1.4.1 AG基因
        1.4.2 AG基因?qū)PL基因表達(dá)的調(diào)控
        1.4.3 SPL基因與BAM基因的相互作用
    1.5 花粉壁及絨氈層在花粉壁形成中的作用
    1.6 本研究工作的內(nèi)容和意義
第2章 材料方法
    2.1 材料試劑
        2.1.1 植株
        2.1.2 菌株
        2.1.3 質(zhì)粒
        2.1.4 儀器
        2.1.5 試劑、抗生素
        2.1.6 培養(yǎng)基配置
    2.2 擬南芥種植
        2.2.1 土壤養(yǎng)植
        2.2.2 培養(yǎng)基培養(yǎng)
    2.3 植物組織總DNA的提取
    2.4 植物總RNA的抽提與純化
    2.5 RNA的反轉(zhuǎn)錄
    2.6 PCR擴(kuò)增
        2.6.1 高保真PCR
        2.6.2 鑒定PCR、RT-PCR
        2.6.3 qPCR
    2.7 DNA膠回收、測(cè)序
    2.8 質(zhì)粒小抽及大抽
    2.9 感受態(tài)的制備與轉(zhuǎn)化
        2.9.1 轉(zhuǎn)化大腸桿菌
        2.9.2 GV3101感受態(tài)的細(xì)胞制備
        2.9.3 轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
    2.10 T-DNA插入位點(diǎn)鑒定
    2.11 基因克隆與互補(bǔ)載體的構(gòu)建
    2.12 轉(zhuǎn)基因植株的篩選
    2.13 原位雜交
第3章 結(jié)果
    3.1 突變體spt16的表型
    3.2 spt16的遺傳分析
    3.3 spt16突變基因的克隆
    3.4 spt16的連鎖分析
    3.5 SPT16基因的表達(dá)及時(shí)空分布
    3.6 spt16的花粉壁發(fā)育缺陷
    3.7 spt16的花藥藥室結(jié)構(gòu)缺失
    3.8 SPT16的基因克隆及功能互補(bǔ)
第4章 討論
    4.1 SPT16在早期花藥發(fā)育中發(fā)揮了重要的作用
    4.2 SPT16可能在造孢細(xì)胞中發(fā)揮作用
    4.3 SPT16在花藥發(fā)育模式形成中發(fā)揮重要作用
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3775122