我國是家豬養(yǎng)殖和消費大國,提高母豬的繁殖力對于促進我國生豬產業(yè)的發(fā)展具有重要的作用。排卵率和產仔數是影響家畜繁殖力的關鍵因素,其中BMP15(bone morphogenetic protein 15)基因已被鑒定是控制綿羊排卵數和多胎性狀的一個主效基因,然而目前在家豬BMP15基因中尚未發(fā)現類似綿羊多胎品系的天然突變�；诟叩炔溉閯游锘蚬δ艿谋Ｊ匦院虲RISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)等基因組編輯技術對動物基因組定點修飾的高效性,應用CRISPR/Cas9技術對家豬BMP15基因進行精確的遺傳修飾,使家豬獲得類似多胎綿羊的天然突變,對于研究該基因對家豬繁殖力的影響以及培育高繁殖力家豬新品系具有重要的意義。本研究通過CRISPR/Cas9對長白豬胎兒成纖維(porcine embryonic fibroblasts,PEF)細胞中BMP15基因進行打靶,T7E1分析顯示打靶效率僅有5%。隨后通過共轉染RGS雙熒光替代性報告載體...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 RGS雙熒光替代性報告載體工作原理
        1.2.2 靶向BMP15基因的CRISPR/Cas9表達載體構建
        1.2.3 篩選BMP15基因編輯細胞的RGS雙熒光替代性報告載體的構建
        1.2.4 PEF細胞的培養(yǎng)與轉染
        1.2.5 T7E1實驗
2 結果與分析
    2.1 RGS雙熒光替代性報告載體轉染PEF細胞
    2.2 CRISPR/Cas9表達載體與RGS雙熒光替代性報告載體共轉染PEF細胞
    2.3 T7E1酶切鑒定結果
3 討論



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