發(fā)布時(shí)間：2023-02-23 07:48

　　蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis,簡(jiǎn)稱(chēng)Bt)自從被發(fā)現(xiàn)至今已被廣泛的應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、森林保護(hù)、園林防治以及衛(wèi)生害蟲(chóng)的防治。目前,越來(lái)越多的Bt制劑和Bt作物得到了廣泛的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用,在防治害蟲(chóng)方面取得了良好的防治效果。自20世紀(jì)20年代以來(lái),Bt蛋白就已經(jīng)用于農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)的防治,并取得了上佳的效果。因此,分離篩選高效、廣譜殺蟲(chóng)活性的Bt菌株,克隆新的殺蟲(chóng)活性基因,為生產(chǎn)實(shí)踐防病治蟲(chóng)提供新的資源。本研究通過(guò)廣泛采取收集貴州地區(qū)土壤腐殖質(zhì),以此分離篩選了一批Bt菌株,并對(duì)其進(jìn)行基因型鑒定、殺蟲(chóng)活性分析,得到一批鱗翅目害蟲(chóng)具有殺蟲(chóng)活性的Bt菌株,并從CS137-2和CS72-1兩個(gè)菌株中克隆得到3個(gè)新的Bt基因。對(duì)貴州多個(gè)地區(qū)共收集1170份樣品進(jìn)行芽胞桿菌抗生素分離處理,總共獲得976株芽胞桿菌,鑒定出181株Bt菌,平均分離率超過(guò)了18%。對(duì)得到這的一百多株Bt菌進(jìn)行基因型分析,發(fā)現(xiàn)其中含cry1、cry2、cry4、cry8、cry9、cry20、cry22、cry28、cry30、cry31、cry37、cry40、cry46、cry52和cyt2共計(jì)15種基因...

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 蘇云金芽胞桿菌
    1.2 蘇云金芽胞桿菌的晶體蛋白
    1.3 Bt菌晶體蛋白結(jié)構(gòu)與功能作用
    1.4 蘇云金芽胞桿菌其它活性因子
        1.4.1 營(yíng)養(yǎng)期殺蟲(chóng)蛋白
        1.4.2 外毒素
        1.4.3 腸毒素
        1.4.4 幾丁質(zhì)酶
        1.4.5 雙效菌素
        1.4.6 Bt其它的毒力因子
    1.5 蘇云芽胞桿菌的開(kāi)發(fā)應(yīng)用
    1.6 本研究的目的與意義
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 土樣采集
        2.1.2 菌株和質(zhì)粒
        2.1.3 培養(yǎng)基與抗生素
        2.1.4 主要實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.5 主要儀器
        2.1.6 供試?yán)ハx(chóng)
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 蘇云金芽胞桿菌的分離與晶體類(lèi)型觀察
        2.2.2 Bt菌SEM觀察
        2.2.3 蘇云金芽胞桿菌基因組的提取
        2.2.4 蘇云金芽胞桿菌晶體蛋白的提取
        2.2.5 菌株晶體蛋白濃度測(cè)定與SDS-PAGE檢測(cè)
        2.2.6 HD73-感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.2.7 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化
        2.2.8 陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子的篩選與鑒定
        2.2.9 質(zhì)粒去甲基化
        2.2.10 PCR擴(kuò)增操作
        2.2.11 酶切和連接體系
        2.2.12 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的回收和連接
        2.2.13 質(zhì)粒提取及穿梭表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.14 蘇云金芽胞桿菌基因的鑒定
        2.2.15 PCR-RFLP分析
        2.2.16 菌株室內(nèi)生物活性分析
        2.2.17 基因組測(cè)序以及組裝
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 菌株分離結(jié)果
        3.1.1 菌株的分離
        3.1.2 伴胞晶體形態(tài)的多樣性
        3.1.3 基因型鑒定
        3.1.4 Bt菌株蛋白檢測(cè)分析
        3.1.5 Bt菌株對(duì)棉鈴蟲(chóng)的生物活性研究
        3.1.6 蘇云金芽胞桿菌CS72-2和CS137-2的菌株特征
        3.1.7 菌株CS72-2和CS137-2蛋白表達(dá)的SDS-PAGE電泳分析
        3.1.8 Bt菌株CS72-2和CS137-2生物活性測(cè)定
    3.2 2株Bt菌株殺蟲(chóng)基因的挖掘
    3.3 菌株CS72-2和CS137-2中基因的克隆、表達(dá)研究
        3.3.1 新基因的全長(zhǎng)擴(kuò)增與克隆
        3.3.2 基因序列分析
        3.3.4 cry28-like基因的克隆與蛋白表達(dá)
        3.3.5 cry37-like和cyt2-like克隆與蛋白表達(dá)
第四章 結(jié)論與討論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3748295