成簇的規(guī)律間隔的短回文重復(fù)序列(Clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats,CRISPR)/CRISPR相關(guān)蛋白(CRISPR-associatedproteins,Cas)系統(tǒng)是目前基因編輯、基因表達(dá)研究的熱點(diǎn),其中靶向RNA的CRISPR/Cas13系統(tǒng)的開(kāi)發(fā)為RNA的干擾和編輯提供了新的方向。文中針對(duì)HEK293T細(xì)胞非同源末端連接(Nonhomologousendjoining,NHEJ)通路修復(fù)關(guān)鍵因子Ku70和Lig4的編碼序列,設(shè)計(jì)并合成CRISPR/Cas13a、b系統(tǒng)相應(yīng)的gRNA,檢測(cè)其對(duì)ku70和lig4基因表達(dá)的影響。結(jié)果顯示,Cas13a對(duì)ku70和lig4的RNA敲減效果可以達(dá)到50%以上,Cas13b對(duì)ku70和lig4的RNA敲減效果分別達(dá)到92%和76%;同時(shí)Cas13a、b系統(tǒng)能將Ku70和Lig4蛋白水平分別下調(diào)至68%和53%。CRISPR/Cas13系統(tǒng)可有效敲減HEK293T細(xì)胞RNA和蛋白質(zhì)表達(dá),為基因功能和調(diào)控研究提供一種新的策略。

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 Cas13a、b系統(tǒng)構(gòu)建
    1.3 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
    1.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Cas13a、b系統(tǒng)對(duì)mRNA的干擾效果
    1.5 Cas13a、b系統(tǒng)的轉(zhuǎn)染效率
    1.6 Western blotting檢測(cè)目的基因的蛋白水平
    1.7 統(tǒng)計(jì)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 Cas13a、b系統(tǒng)構(gòu)建
    2.2 Cas13a、b系統(tǒng)對(duì)ku70和lig4基因mRNA水平的影響
    2.3 Cas13a、b系統(tǒng)轉(zhuǎn)染效率評(píng)估
    2.4 Cas13a、b系統(tǒng)對(duì)Ku70和Lig4蛋白水平的影響
3 討論



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