目的構(gòu)建單純皰疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)UL27和UL29雙基因shRNA慢病毒表達載體,并檢測其在HEK293細胞中的表達。方法針對HSV-2 UL27、UL29基因,各篩選干擾效率最佳的shRNA片段相連接,構(gòu)建雙基因共表達慢病毒載體,并轉(zhuǎn)染HEK293細胞作為干擾組,另設(shè)空白對照組(不做任何處理)和陰性對照組(轉(zhuǎn)染不針對任何基因的慢病毒載體)。轉(zhuǎn)染48或24 h后接種HSV-2,RT-PCR和Western blot法檢測各組細胞中目的基因mRNA和蛋白的表達水平,MTT法檢測各組細胞的存活率。結(jié)果干擾組UL27和UL29基因mRNA的表達抑制率可達(78.61±2.14)%和(84.86±1.52)%,同時gB和ICP8蛋白的相對表達量明顯下降(P均<0.05),細胞的存活明顯率提高(P均<0.05)。結(jié)論構(gòu)建的HSV-2 UL27、UL29雙基因shRNA重組慢病毒表達載體能在HEK293細胞中表達,為后續(xù)HSV-2的基因治療奠定了實驗基礎(chǔ)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病毒、細胞及載體
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3雙基因shR NA重組慢病毒表達載體的構(gòu)建
    1.4細胞分組及轉(zhuǎn)染
    1.5雙基因mR NA在轉(zhuǎn)染細胞中表達的檢測
    1.6 雙蛋白在轉(zhuǎn)染細胞中表達的檢測
    1.7 轉(zhuǎn)染細胞存活率的檢測
    1.8 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 雙基因sh R N A重組慢病毒表達載體的鑒定
    2.2 細胞的轉(zhuǎn)染效率
    2.3 各組細胞的病變情況
    2.4 UL27和UL29基因m R N A在HEK293細胞中的表達
    2.5 g B和ICP8蛋白在HEK293細胞中的表達
    2.6 各組HEK293細胞的存活率
3 討論



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