鹽度是影響刺參Apostichopus japonicus養(yǎng)殖中最常見的非生物因素,是限制刺參養(yǎng)殖行業(yè)穩(wěn)定發(fā)展的主要因素。低鹽脅迫是刺參養(yǎng)殖過程中經(jīng)常面臨的問題,為了更好地提高刺參養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益,研究刺參在低鹽下的適應(yīng)機(jī)制是不可或缺的。微小RNA（miRNA）是長(zhǎng)度為18~25個(gè)核苷酸的內(nèi)源性非編碼小RNA,在生物體的生命活動(dòng)過程中具有調(diào)節(jié)功能,通過轉(zhuǎn)錄后抑制靶基因mRNA的翻譯或降解mRNA從而起到響應(yīng)環(huán)境影響的作用。本研究課題組構(gòu)建了刺參各組織在18 psu處理6h的小RNA文庫(kù)和轉(zhuǎn)錄組cDNA文庫(kù)并進(jìn)行了高通量測(cè)序,獲得了差異表達(dá)的miRNAs和靶基因,并對(duì)其靶基因進(jìn)行了預(yù)測(cè)。本研究在高通量測(cè)序中獲得的刺參鹽度脅迫相關(guān)miRNAs和靶基因的基礎(chǔ)上,從中選取3個(gè)miRNA（miR-2008、miR-278-3p、miR-92a）及對(duì)應(yīng)的靶基因,通過對(duì)其在體外和刺參體內(nèi)的表達(dá)模式進(jìn)行分析,獲得miRNA及靶基因在刺參鹽度脅迫過程中發(fā)揮的作用,為刺參的鹽度適應(yīng)機(jī)制提供數(shù)據(jù)支持。研究成果如下:（1）從刺參鹽度脅迫后的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)表達(dá)譜中篩選出4個(gè)差異表達(dá)的基因,包括:單羧酸轉(zhuǎn)... 

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 miRNA概述
    1.2 參與水產(chǎn)動(dòng)物環(huán)境脅迫應(yīng)答的基因或者miRNA
    1.3 參與水產(chǎn)動(dòng)物鹽度適應(yīng)的基因
    1.4 參與水產(chǎn)動(dòng)物鹽度脅迫應(yīng)答的miRNA
    1.5 參與刺參鹽度應(yīng)答的基因
第二章 鹽度應(yīng)激下刺參4個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的適應(yīng)表達(dá)研究
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1.3 引物設(shè)計(jì)與篩選
        2.1.4 RNA的提取
        2.1.5 熒光定量PCR檢測(cè)基因表達(dá)
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 低鹽脅迫下SLC16a13 基因在刺參中的表達(dá)
        2.2.2 低鹽脅迫下SLC6a8 基因在刺參各組織中的表達(dá)差異
        2.2.3 低鹽脅迫下刺參不同組織中FIBCD1 基因的差異表達(dá)
        2.2.4 低鹽脅迫下Gria1 基因在刺參各組織中的差異表達(dá)
    2.3 討論
        2.3.1 低鹽脅迫下的單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族16a13 基因在刺參中的表達(dá)
        2.3.2 低鹽脅迫下的單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族6a8 基因在海參中的表達(dá)
        2.3.3 低鹽脅迫下的谷氨酸離子受體AMPA型亞基1 基因在刺參各組織中的表達(dá)
        2.3.4 低鹽脅迫下的甲殼素受體蛋白基因在刺參各組織中的表達(dá)
    2.4 小結(jié)
第三章 miR-2008 及靶基因PLEKHA3 表達(dá)分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 主要試劑及儀器
        3.1.3 引物
        3.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 差異表達(dá)的6個(gè)miR-2008 及靶基因的PCR驗(yàn)證
        3.2.2 miR-2008 及靶基因PLEKHA3 在低鹽脅迫下的表達(dá)
        3.2.3 miRNA及 PLEKHA3在miR-2008 干擾后體腔細(xì)胞中的表達(dá)
        3.2.4 miR-2008 過表達(dá)后刺參在鹽脅下miRNA及 PLEKHA3 表達(dá)
        3.2.5 miR-2008 干擾對(duì)鹽度脅迫刺參離子濃度、滲透壓產(chǎn)生的影響
        3.2.6 miR-2008 干擾對(duì)鹽脅刺參呼吸樹酶活的影響
        3.2.7 將SIPLEKHA3 導(dǎo)入刺參后miRNA及 PLEKHA3 的表達(dá)
        3.2.8 PLEKHA3 干擾對(duì)鹽度脅迫刺參ROS的影響
        3.2.9 PLEKHA3 干擾對(duì)鹽脅刺參離子濃度、滲透壓的影響
        3.2.10 PLEKHA3 干擾對(duì)活體刺參呼吸樹酶活產(chǎn)生的影響
    3.3 討論
    3.4 小結(jié)
第四章 miR-92a和 miR-278-3p靶基因的功能驗(yàn)證
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 主要試劑及儀器
        4.1.3 引物
        4.1.4 實(shí)驗(yàn)方法
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 mi R-92a及靶基因PLSCR2 在低鹽脅迫下刺參體腔細(xì)胞中的表達(dá)
        4.2.2 miR-278-3p及靶基因Htr2b在低鹽脅迫下刺參體腔細(xì)胞中的表達(dá)
        4.2.3 miRNA及 PLSCR2在miR-92a干擾后體腔細(xì)胞中的表達(dá)
        4.2.4 miRNA及 Htr2b在 miR-278-3p干擾后體腔細(xì)胞中的表達(dá)
    4.3 討論
        4.3.1 miR-92a和靶基因PLSCR2 在刺參上的功能分析
        4.3.2 miR-278-3p和靶基因Htr2b在刺參上的功能分析
    4.4 小結(jié)
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
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[7]凡納濱對(duì)蝦和三疣梭子蟹滲透調(diào)節(jié)相關(guān)基因的篩選與表達(dá)分析[D]. 胡巖巖.中國(guó)海洋大學(xué) 2012



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