作者擬研究rfaE基因在副豬嗜血桿菌（Haemophilus parasuis,HPS）脂寡糖（LOS）刺激豬肺泡巨噬細(xì)胞（PAMs）信號(hào)通路分子的轉(zhuǎn)錄表達(dá)和MAPKs/NF-κB信號(hào)通路中的作用。提取HPS SC096株及其rfaE基因缺失株（ΔrfaE）和互補(bǔ)株（cΔrfaE）的LOS,分別用5和10μg HPS-LOS、ΔrfaE-LOS和cΔrfaE-LOS刺激PAMs,分別在不同時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞,提取RNA和蛋白質(zhì)。將提取的RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA,運(yùn)用RT-PCR檢測(cè)TLR4、MD2、NF-κB、MAP2 K2、ERK、P38和JNK的mRNA轉(zhuǎn)錄水平。測(cè)定提取蛋白質(zhì)的濃度,利用Western blot方法檢測(cè)NF-κB p65/phospho-NF-κB p65、IκBα、ERK1/2、JNK和p38/phospho-p38蛋白的表達(dá)量。結(jié)果表明用5和10μg HPS-LOS刺激細(xì)胞6、12和24h后,TLR4、MD2、MAP2K2、ERK、P38和JNK的mRNA轉(zhuǎn)錄水平均顯著高于ΔrfaE-LOS刺激細(xì)胞后的以上轉(zhuǎn)錄因子的mRNA水平（P＜0.05）,但NF-κB的mRN... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌種、細(xì)胞
    1.2 主要試劑
    1.3 LOS的提取及濃度的測(cè)定
    1.4 豬肺泡巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)及誘導(dǎo)
    1.5 總RNA的提取與反轉(zhuǎn)錄
    1.6 Real-Time PCR
    1.7 Western blot
    1.8 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
    2.1 RT-PCR檢測(cè)LOS對(duì)PAMs信號(hào)通路分子的mRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響
    2.2 Western blot檢測(cè)LOS對(duì)NF-κB和MAPK信號(hào)通路的影響
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]rfaE基因在副豬嗜血桿菌LOS刺激豬肺泡巨噬細(xì)胞炎性因子mRNA轉(zhuǎn)錄中的作用[J]. 曾澤,岳華,馮曉輝,何歡,張斌.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2015(07)



本文編號(hào)：3720479