目的:MEX3A基因是一種新發(fā)現(xiàn)的腫瘤相關因子,其與膀胱癌的關系尚未明確。本研究的目的在于通過慢病毒介導的RNA干擾技術,探討抑制MEX3A基因表達對膀胱癌細胞增殖和凋亡功能的影響。研究方法:1.培養(yǎng)5637和T24兩種膀胱癌細胞株,實時定量PCR檢測MEX3A基因在兩種細胞株中的表達量,選取表達量高者進行后續(xù)實驗。2.參照基本設計原則,設計、選擇合適的RNA干擾序列。3.合成含干擾序列的雙鏈DNA,隨后連接酶作用后的慢病毒載體,再將產(chǎn)物轉(zhuǎn)入感受態(tài)大腸桿菌細胞,經(jīng)聚合酶鏈式反應鑒并測序驗證后,進行質(zhì)粒抽提應用。4.鑒定及測序合格后與包裝載體共轉(zhuǎn)染293T細胞產(chǎn)生慢病毒顆粒;病毒滴度測定后轉(zhuǎn)染經(jīng)步驟一選擇的細胞株（5637和T24二選一）,實驗組轉(zhuǎn)染MEX3A-shRNA慢病毒,對照組轉(zhuǎn)染陰性對照慢病毒,經(jīng)抗生素篩選建立穩(wěn)定表達siRNA的細胞株。5.收集實驗組和對照組細胞并提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄后經(jīng)實時定量PCR檢測MEX3A基因敲減效率。6.慢病毒轉(zhuǎn)染三天后,將實驗組和對照組細胞分別接種于96孔板連續(xù)培養(yǎng)5天,每天使用全視野細胞掃描分析儀進行細胞計數(shù)并拍照。7.慢病毒轉(zhuǎn)染五天后,分別收... 

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
2 材料與方法
    2.1 主要試劑和儀器
    2.2 MEX3A-shRNA慢病毒載體的構(gòu)建
    2.3 慢病毒載體的包裝及滴度測定
    2.4 MEX3A基因在5637細胞株和T24細胞株的表達
    2.5 慢病毒感染及篩選穩(wěn)定表達MEX3A-shRNA的細胞株
    2.6 Real-TimePCR檢測MEX3A基因敲減效率
    2.7 細胞增殖檢測
    2.8 細胞凋亡檢測
    2.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
3 結(jié)果
    3.1 MEX3A-shRNA慢病毒載體的鑒定及測序
    3.2 慢病毒載體的包裝及滴度測定
    3.3 MEX3A基因在膀胱癌細胞的表達
    3.4 慢病毒轉(zhuǎn)染5637細胞株及MEX3A基因的敲減效率
    3.5 細胞增殖檢測結(jié)果
    3.6 細胞凋亡檢測結(jié)果
4 討論
5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3708639