作為目前最新、最先進的基因編輯技術,CRISPR/Cas9系統(tǒng)為分子細胞生物學帶來革命性發(fā)展,以它的簡單高效、靈活性以及可實現(xiàn)DNA序列的定向突變而被廣泛使用.斑馬魚的park2基因位于第13號染色體上,編碼的Parkin蛋白是一個E3泛素連接酶.該基因在斑馬魚中的功能還不清楚.利用CRISPR/Cas9系統(tǒng),首次在斑馬魚胚胎中實現(xiàn)了park2基因的大片段刪除.由于斑馬魚在發(fā)育和疾病研究中有很大優(yōu)勢,實現(xiàn)park2基因敲除將有助于將來進一步研究該基因的功能. 

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 斑馬魚品系及飼養(yǎng)
    1.2 斑馬魚胚胎基因組DNA提取與PCR擴增
    1.3 Cas9 mRNA和sgRNA的體外合成與純化
    1.4 斑馬魚胚胎顯微注射
        1.4.1 配魚及受精卵的收集:
        1.4.2 斷針與定量:
        1.4.3 顯微注射:
2 結果與分析
    2.1 突變park2基因的實驗設計
    2.2 Cas9靶點的選擇與優(yōu)化
    2.3 大片段刪除效率檢測及測序結果分析
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Efficient Gene Targeting in Zebrafish Mediated by a Zebrafish-Codon-Optimized Cas9 and Evaluation of Off-Targeting Effect[J]. Da Liu,Zhanxiang Wang,An Xiao,Yutian Zhang,Wenyuan Li,Yao Zu,Shaohua Yao,Shuo Lin,Bo Zhang.  Journal of Genetics and Genomics. 2014(01)



本文編號：3662184