靈芝酸是靈芝產(chǎn)的一種有30個(gè)碳原子的四環(huán)三萜類(lèi)化合物,研究表明靈芝酸具有抗HIV和抗腫瘤等多種藥理學(xué)活性。靈芝酸具有兩種不同的化學(xué)結(jié)構(gòu)。其中,Ⅰ型靈芝酸的羊毛甾醇骨架上只有一個(gè)單雙鍵結(jié)構(gòu),而Ⅱ型靈芝酸的羊毛甾醇骨架上含有兩個(gè)共軛雙鍵。目前,菌絲體液體培養(yǎng)靈芝細(xì)胞是一種可以有效生產(chǎn)靈芝酸的方法。由于液體培養(yǎng)靈芝細(xì)胞生產(chǎn)的靈芝酸產(chǎn)量較低,限制了靈芝酸的商業(yè)化生產(chǎn)和臨床應(yīng)用,因此進(jìn)一步提高靈芝中靈芝酸的產(chǎn)量具有重要意義。本文中,我們將整合發(fā)酵策略和基因工程改造應(yīng)用到了提高靈芝菌絲體發(fā)酵生產(chǎn)單體靈芝酸中。我們研究了在液體靜置培養(yǎng)靈芝細(xì)胞中整合表達(dá)透明顫菌血紅蛋白（VHb）和鈣離子添加策略下靈芝酸的生物合成情況。結(jié)果顯示,整合策略下五種單體靈芝酸GA-O,-Mk,-T,-S和-Me的最大產(chǎn)量分別為1451.33±67.50,179.66±5.06,1320.59±20.84,1431.23±79.74和1283.81±85.13?g/100 mg細(xì)胞干重,這些產(chǎn)量分別為靜置培養(yǎng)條件下野生型菌株（對(duì)照）中各單體靈芝酸含量的2.66,2.50,2.52,3.50和5.98倍。整合策略下單體靈芝酸GA... 

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 高等藥用真菌
    1.2 靈芝及其生物活性成分
    1.3 靈芝酸結(jié)構(gòu)、種類(lèi)及其藥理活性
    1.4 靈芝酸的生物合成
    1.5 靈芝酸的發(fā)酵生產(chǎn)
    1.6 整合發(fā)酵策略與基因工程在提高次級(jí)代謝產(chǎn)物產(chǎn)量中的應(yīng)用
    1.7 靈芝酸的多樣性
    1.8 立題的目的和意義
    1.9 本文的主要研究?jī)?nèi)容與技術(shù)路線
第二章 在VHb靈芝工程菌株中整合液體靜置培養(yǎng)和鈣離子添加策略對(duì)靈芝酸生物合成的影響
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 菌種及培養(yǎng)
        2.2.2 靈芝細(xì)胞生物量以及培養(yǎng)基中殘?zhí)堑暮繙y(cè)定
        2.2.3 靈芝酸單體的提取與含量測(cè)定
        2.2.4 中間代謝產(chǎn)物鯊烯和羊毛甾醇的提取與檢測(cè)
        2.2.5 靈芝酸生物合成相關(guān)基因hmgr,fps,sqs和cyp-5150l8表達(dá)水平的檢測(cè)
        2.2.6 數(shù)據(jù)處理與分析方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 靜置培養(yǎng)條件下VHb的表達(dá)對(duì)靈芝酸產(chǎn)量的影響
        2.3.2 整合策略下靈芝酸的生物合成
        2.3.3 整合策略對(duì)中間代謝產(chǎn)物鯊烯和羊毛甾醇積累量的影響
        2.3.4 整合策略下靈芝酸生物合成相關(guān)基因hmgr,fps,sqs和cyp-5150l8表達(dá)水平
    2.4 討論
    2.5 本章小結(jié)
第三章 靜置培養(yǎng)條件下VHb表達(dá)對(duì)Ⅰ型與Ⅱ型靈芝酸分布的影響
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 靜置培養(yǎng)條件下VHb表達(dá)對(duì)靈芝酸產(chǎn)量影響
        3.2.2 細(xì)胞色素P450基因A2,V2和A13表達(dá)水平的檢測(cè)
        3.2.3 數(shù)據(jù)處理與分析方法
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 靜置培養(yǎng)條件下VHb表達(dá)對(duì)Ⅰ型和Ⅱ型靈芝酸比例的影響
        3.3.2 靜置培養(yǎng)條件下VHb表達(dá)對(duì)P450基因A2,V2和A13轉(zhuǎn)錄水平的影響
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
第四章 結(jié)論與展望
    4.1 全文結(jié)論
    4.2 展望
    4.3 文章創(chuàng)新點(diǎn)
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄A 攻讀碩士期間發(fā)表的論文
附錄B 標(biāo)準(zhǔn)曲線


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]靈芝三萜類(lèi)化合物藥理作用研究進(jìn)展[J]. 羅俊,林志彬.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2002(07)
[2]靈芝三萜類(lèi)成分在體內(nèi)外對(duì)小鼠免疫性肝損傷的影響[J]. 王明宇,林志彬.  中國(guó)藥學(xué)雜志. 2000(12)
[3]人工紫芝的抗炎鎮(zhèn)痛作用研究[J]. 萬(wàn)阜昌,黃道齋.  中國(guó)中藥雜志. 1992(10)

碩士論文
[1]抗腫瘤活性化合物靈芝酸T高效制備方法的研究[D]. 王家樂(lè).上海交通大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3648343