紫花苜蓿（Medicago sativa）在我國(guó)西北干旱和半干旱地區(qū)生態(tài)環(huán)境建設(shè)和畜牧業(yè)發(fā)展上具有重要的作用,但由于其耐鹽抗旱性較弱在該地區(qū)很難獲得高產(chǎn)。而將優(yōu)良抗逆基因?qū)胱匣ㄜ俎Ｖ幸愿牧计淇鼓嫘?是現(xiàn)階段常用的育種手段。多漿旱生植物霸王（Zygophyllum xanthoxylum）通過(guò)吸收生境中的Na⁺并將其區(qū)域化至葉片液泡中來(lái)抵御逆境脅迫。本課題組前期克隆了其體內(nèi)調(diào)控Na⁺區(qū)域化的液泡膜Na⁺/H⁺逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和為其提供質(zhì)子驅(qū)動(dòng)力的H⁺-PPase編碼基因ZxNHX1和ZxVP1-1,并將它們共轉(zhuǎn)化入紫花苜蓿中,T₀和T₁代轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿的耐鹽抗旱性均顯著增強(qiáng)。本研究進(jìn)一步評(píng)估T₂代共表達(dá)ZxNHX1-ZxVP1-1轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿的抗旱耐鹽性,以期為今后的推廣和應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。此外,課題組還發(fā)現(xiàn)另一耐氯植物沙芥（Pugionium cornutum）可以吸收大量Cl^-于地上... 

【文章來(lái)源】：蘭州大學(xué)甘肅省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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中文摘要
Abstract
第一章 引言
第二章 國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展
    2.1 Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白研究進(jìn)展
        2.1.1 Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白
        2.1.2 Na~+/H~+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的功能
    2.2 液泡膜H~+-PPase蛋白研究進(jìn)展
        2.2.1 液泡膜H~+-PPase蛋白
        2.2.2 液泡膜H~+-PPase的功能
    2.3 Cl-通道蛋白研究進(jìn)展
        2.3.1 Cl~-通道蛋白
        2.3.2 Cl~-通道蛋白的功能
    2.4 紫花苜蓿遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展
        2.4.1 基因型的選擇
        2.4.2 外植體的選擇
        2.4.3 農(nóng)桿菌菌株的選擇
        2.4.4 表達(dá)載體的選擇
        2.4.5 轉(zhuǎn)化方案的選擇
第三章 T_2代共表達(dá)ZxNHX1-ZxVP1-1轉(zhuǎn)基因紫花苜�？购的望}性評(píng)價(jià)
    3.1 材料與方法
        3.1.1 試驗(yàn)材料
        3.1.2 處理方法
        3.1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法
        3.1.4 數(shù)據(jù)分析
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 T_2代轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿具有較強(qiáng)的耐鹽性
        3.2.2 T_2代轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿具有較強(qiáng)的抗旱性
        3.2.3 T_2代轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿的相對(duì)生長(zhǎng)速率高于野生型
        3.2.4 T_2代轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿維持了較高的保水性能
        3.2.5 T_2代轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿的光合性能優(yōu)于野生型
        3.2.6 T_2代轉(zhuǎn)基因紫花苜蓿根系活力顯著高于野生型
    3.3 討論
第四章 植物表達(dá)載體的構(gòu)建
    4.1 .材料與方法
        4.1.1 載體與菌株
        4.1.2 酶、抗生素與各類(lèi)試劑盒
        4.1.3 培養(yǎng)基與抗生素的配制
        4.1.4 引物設(shè)計(jì)與合成
        4.1.5 擴(kuò)增片段體系與程序
        4.1.6 擴(kuò)增片段凝膠電泳與回收
        4.1.7 質(zhì)粒提取方法
        4.1.8 質(zhì)粒與PCR產(chǎn)物的酶切連接或In-Fusion連接
        4.1.9 進(jìn)行大腸桿菌轉(zhuǎn)化及陽(yáng)性菌液檢測(cè)
        4.1.10 植物表達(dá)載體構(gòu)建圖譜
        4.1.11 對(duì)農(nóng)桿菌EHA105的轉(zhuǎn)化
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 Bar基因?qū)雙CAMBIA1302表達(dá)載體中
        4.2.2 ZxNHX1-HA導(dǎo)入對(duì)照載體中
        4.2.3 將pGmUbi啟動(dòng)子-目的基因-NOS終止子導(dǎo)入35s::ZxNHX1-HA載體中
    4.3 討論
第五章 紫花苜�？剐灾仓甑墨@得與分子鑒定
    5.1 材料與方法
        5.1.1 紫花苜蓿植株、農(nóng)桿菌菌株和植物表達(dá)載體
        5.1.2 培養(yǎng)基以及激素等的配制
        5.1.3 農(nóng)桿菌的活化以及紫花苜蓿遺傳轉(zhuǎn)化體系的過(guò)程
        5.1.4 轉(zhuǎn)基因植株的分子檢測(cè)
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 紫花苜蓿的遺傳轉(zhuǎn)化與抗性植株獲得
        5.2.2 轉(zhuǎn)基因植株的檢測(cè)
    5.3 討論
第六章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3638382