松材線蟲�。≒ine wilt disease）是由松材線蟲（Bursaphelenchus xylophilus）引起的毀滅性的松屬植物流行性病害。松材線蟲病常年在我國多個省市發(fā)生,造成嚴重損失。近來研究發(fā)現(xiàn)松材線蟲作為外來入侵物種其入侵性與其繁殖率有密切聯(lián)系,且種群性比是影響繁殖率的重要因素,但目前對于松材線蟲性別決定和分化機制尚不清楚。另一方面,松材線蟲dauer幼蟲階段具有較強適應不良環(huán)境的能力,且dauer幼蟲能借由天牛的取食活動進行擴散,但對于松材線蟲dauer幼蟲的形成機制尚未明確。深入研究松材線蟲性別決定和dauer幼蟲形成機制問題有利于發(fā)展新的松材線蟲病防控策略。本研究本研究參考秀麗隱桿線蟲（Caenorhabditis elegans）性別決定基因fem-1和fem-2,以及與dauer幼蟲形成基因daf-12,克隆松材線蟲中同源基因�？寺～@得松材線蟲Bxy012009、Bxy005783和Bxy003854片段后,采用實時定量PCR、原位雜交、RNA干擾等技術,探究其時空動態(tài)表達特性和調(diào)控功能。具體研究結(jié)果如下:一、實時定量PCR結(jié)果表明,Bxy012009和Bx... 

【文章來源】：浙江農(nóng)林大學浙江省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

秀麗隱桿線蟲性別決定信號通路[51]

1文獻綜述9圖1.4dauer形成調(diào)控模型[70]Figure1.4AmodelfortheregulatoryplasticityofdauerformationTGF-β途徑是調(diào)節(jié)dauer形成的主要內(nèi)分泌途徑之一[75]。通過遺傳分組，daf-1和daf-4，daf-7，daf-8和daf-14突變體（均為Daf-c）都可以被daf-3和daf-5（均為Daf-d）有效抑制[76]。這些Daf-c基因型還顯示出對取食和覓食的影響，增加脂肪沉積和卵子滯留。這些基因確定了TGF-β信號轉(zhuǎn)導的核心成分：daf-7基因編碼TGF-β，daf-1和daf-4分別編碼I型和II型TGF-β受體[77-78]。daf-3，daf-8和daf-14編碼SMAD，是該途徑的核效應子[79-80]。最后，daf-5編碼轉(zhuǎn)錄因子SNO/SKI，與SMAD相互作用[81]。daf-7/TGF-β僅在ASI神經(jīng)感覺細胞中表達，而下游受體和轉(zhuǎn)錄因子則廣泛表達[82-83]。正如遺傳學所預測的那樣，daf-7/TGF-β在神經(jīng)細胞中特異表達，其表達受到食物的正向調(diào)節(jié)，并受到dauer信息素和高溫的抑制[82,84]。在有利的條件下，高水平分泌的daf-7/TGF-β結(jié)合并激活靶組織中的DAF-1/4受體激酶。這些受體被認為會磷酸化daf-8和daf-14編碼的SMAD，從而導致其活化，從而抑制和daf-5/SNOSKI形成復合物，并促進能量代謝和生殖生長。在不利的條件下，減少daf-7/TGF-β的表達，daf-5/SNOSK與daf-3/SMAD形成復合體，抑制daf-9基因的表達，使得線蟲進入dauer期[85-86]。且有研究表

松材線蟲Bxy012009、Bxy005783和Bxy003854表達特性與功能分析263結(jié)果與分析3.1松材線蟲Bxy012009、Bxy005783和Bxy003854基因生物信息學分析3.1.1松材線蟲Bxy012009基因生物信息學分析以松材線蟲cDNA為模板，用特異性引物PCR擴增后得到一條約856bp的Bxy012009基因片段。利用NCBI的ORFfinder進行開放閱讀框搜索，發(fā)現(xiàn)Bxy012009包含一個681bp的完整ORF，編碼226個氨基酸，且對序列進行分析顯示與fem-1基因高度同源。通過蛋白質(zhì)序列理化參數(shù)計算軟件ExPASyProtParamtool獲得了fem-1基因蛋白的分子式為：C1100H1756N296O351S14，分子量為25.19kDa，全長蛋白的理論等電點pI值為4.8。推測其體外半衰期為30h，不穩(wěn)定指數(shù)（II）為26.14，是一類較穩(wěn)定的蛋白。TMHMM預測結(jié)果顯示該蛋白不含有跨膜結(jié)構(gòu)域；SignalP3.0Server預測結(jié)果顯示該蛋白不具有N端的信號肽序列，表明蛋白可能定位在細胞質(zhì)基質(zhì)或細胞器。利用DNAMAN多序列比對發(fā)現(xiàn)，Bxy012009編碼的蛋白與多個物種的錨蛋白重復序列具有較高一致性（如圖3.1A），表明該蛋白屬于含有ANK重復序列的一類蛋白。利用MEGA7對不同物種的fem-1蛋白序列做系統(tǒng)發(fā)育分析，結(jié)果顯示，松材線蟲Bxy012009與秀麗隱桿線蟲位于同一分支，并與其它物種區(qū)分開來（圖3.1B）。注：A蛋白序列比對；B進化分析圖3.1Bxy012009基因序列比對與發(fā)育進化分析Figure3.1SequencealignmentandphylogeneticanalysisofBxy012009

【參考文獻】：
期刊論文
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[4]松墨天牛攜帶松材線蟲傳播的化學生態(tài)學機制[J]. 鄭雅楠,楊忠岐,王小藝.  植物保護. 2014(01)
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[6]松材線蟲病病原學研究的幾個問題[J]. 葉建仁,黃麟.  中國森林病蟲. 2012(05)
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