目的:苯并[a]芘（B[a]P）經(jīng)過(guò)代謝活化后形成終致癌物7,8-二羥-9,10-環(huán)氧苯并[a]芘（BPDE）,與DNA親和位點(diǎn)共價(jià)結(jié)合形成BPDE-DNA加合物誘發(fā)基因突變,是苯并[a]芘（B[a]P）誘發(fā)肺癌等腫瘤的重要機(jī)制之一,但其加合形成加合物的靶基因目前研究還不全面。本次研究旨在利用染色質(zhì)免疫共沉淀測(cè)序技術(shù)（ChIP-Seq）,全面分析BPDE加合基因及其功能和信號(hào)通路,為進(jìn)一步尋找B[a]P靶基因,深入研究B[a]P致癌機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。方法:選取人支氣管上皮樣細(xì)胞株16HBE細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。甲醛交聯(lián)后收集細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞濃度2′10⁷/ml,加入對(duì)應(yīng)體積的細(xì)胞裂解緩沖液,將裂解產(chǎn)物等分為BPDE孵育組與DMSO溶劑對(duì)照組,分別與BPDE儲(chǔ)備液和等體積DMSO混勻,37℃孵育24h后,進(jìn)行超聲處理使細(xì)胞破碎,將染色質(zhì)片段化為可檢測(cè)的大�。�100-500bp）,用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)片段大小。以標(biāo)準(zhǔn)的免疫沉淀方法,采用Anti-BPDE body（Clone-8E11）及A/G磁珠富集BPDE-DNA復(fù)合物。BPDE-DNA復(fù)合物洗脫和反交聯(lián)后進(jìn)行純化,對(duì)照品... 

【文章來(lái)源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁(yè)數(shù)】：88 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

染色質(zhì)片段化情況

圖 2.陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照及 Input 擴(kuò)增產(chǎn)物 紫外分光光度計(jì)檢測(cè)兩個(gè)重復(fù) BPDE ChIP 樣品 ChIP-Seq 使用，見(jiàn)表 3。DNA 的濃度及純度達(dá)的送樣要求：濃度 1ng/μL；純度 OD260/280 為

不同細(xì)胞濃度的膠圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]BaP誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中DNA甲基化水平的變化[J]. 劉海龍,高瑋,古盼,鄧燕霞,黃新鳳,吳德生,劉建軍,黃海燕.  癌變·畸變·突變. 2017(01)
[2]環(huán)境因素對(duì)DNA甲基化的影響[J]. 曹家雪,張紅平,杜立新.  遺傳. 2013(07)
[3]毒理基因組學(xué)研究進(jìn)展[J]. 陸韻,侯凌燕,胡洪營(yíng),李莉.  生態(tài)環(huán)境學(xué)報(bào). 2010(09)
[4]苯并（a）芘作用下人胚肺細(xì)胞JWA基因的表達(dá)及其與DNA損傷修復(fù)的關(guān)系[J]. 顧燈安,李?lèi)?ài)萍,朱婷,葉健,周建偉.  中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志. 2005(03)
[5]毒理基因組學(xué)對(duì)毒理學(xué)發(fā)展的影響[J]. 莊志雄.  衛(wèi)生毒理學(xué)雜志. 2005(01)



本文編號(hào)：3572297