白斑綜合征病毒（white spot syndrome virus,WSSV）是一種引起對蝦爆發(fā)性死亡的病毒,因其傳播速度快、宿主范圍廣、致死率高等特點,已成為對蝦養(yǎng)殖業(yè)嚴重病害之一。目前全球已研制出多種藥物,如各種重組疫苗（DNA疫苗、RNA疫苗和蛋白亞單位疫苗）等,在實驗室水平均有成效。然而,至今尚未見可在養(yǎng)殖業(yè)規(guī)模應(yīng)用。我們研究集體已根據(jù)WSSV主要囊膜蛋白VP28在防治WSSV中的重要作用,用藍藻這一原核表達系統(tǒng)表達VP28蛋白,經(jīng)實驗驗證可有效免疫對蝦蝦苗�；谖覀冄芯考w十幾年來的研究進展,本學位研究著重關(guān)注這種重組疫苗產(chǎn)業(yè)化過程中產(chǎn)品的穩(wěn)定性和安全性,得到以下主要結(jié)果:（1）針對本疫苗在中試生產(chǎn)中發(fā)生目的基因丟失的情況,對重組載體質(zhì)粒（攜帶目的基因）的穩(wěn)定性作了分析。關(guān)鍵重組載體質(zhì)粒pRL-489-vp28和pGM-T-WSSV-vp28在轉(zhuǎn)化大腸桿菌TOP10后,通過不同抗生素壓力篩選得到保持良好穩(wěn)定性條件。發(fā)現(xiàn)前者超過10 h,后者超過7 h后,質(zhì)粒損失率均迅速大于10%。培養(yǎng)10-16個小時后,轉(zhuǎn)化大腸桿菌菌液OD600值可達1.2-2.8之間,有效細菌平均卻只在6... 

【文章來源】：上海海洋大學上海市

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

WSSV(中國大陸株)基因組基本結(jié)構(gòu)

上海海洋大學碩士學位論文一個月，重組疫苗樣品便開始發(fā)黃、出現(xiàn)白色霉菌并有腥臭味(圖 3-1 C)；在 4 ℃低溫冰箱中存放的樣品雖然放置 5 個月時還沒有發(fā)出異味，但是會在四個月左右出現(xiàn)白色霉菌(圖 3-1 B)，且邊緣有藍色液體滲出(圖 3-1 D)，疑似為藻粉中藻藍蛋白從細胞里滲出。-80℃和-20℃條件下儲存的樣品變化差異不明顯，樣品表面仍為綠色的藻體本身顏色(圖 3-1 A)，但是否兩者之間有具體的變化、差異，需進行更為細致的分子檢測和生物學活性檢測。

圖 3-3 RT-qPCR 檢測標準曲線Fig.3-3 RT-qPCR detection standard curve預(yù)實驗發(fā)現(xiàn)，由于重組疫苗本身的蛋白質(zhì)特性，樣品在 4℃處理條件下連月取樣中，超過2個月即無法提取完整RNA作為RT-qPCR檢測樣本模板得到其檢測結(jié)果。同理，30℃儲存的樣品在一個月以上時就開始發(fā)黃產(chǎn)生甚至變黏使其無法提取 RNA。因此在后續(xù)檢測中，連續(xù)三批重組疫苗取第 1-3 批樣品中，-80℃取樣均為儲存 6 個月的樣品（簡記為 A1、A2、A3），取樣均為儲存 6 個月的樣品（簡記為 B1、B2、B3），4℃取樣均為儲存 樣品（簡記為 C1、C2、C3），30℃取樣均為儲存 1 個月的樣品（簡記為D2、D3）。 3-5 是連續(xù)三批重組疫苗在不同儲存溫度下的 RT-qPCR 實驗結(jié)果，圖 3-電泳圖（引物大小 184bp）。綜合圖 3-4 和表 3-5 實驗結(jié)果可以看出，樣品℃儲存 6 個月后仍具有良好的基因表達率，即 vp28 基因沒有丟失。-20℃、 30℃中儲存重組疫苗，即使儲存時間短，也有部分樣品中 vp28 基因丟失。The logarithm of the copy numberM A1 B1 C1 A2 B2 C2 A3 B3 C3

【參考文獻】：
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碩士論文
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本文編號：3561386