發(fā)布時(shí)間：2021-12-28 20:22

　　目的構(gòu)建小鼠Spata7基因視網(wǎng)膜內(nèi)敲除模型,探討Spata7基因突變導(dǎo)致光感受器細(xì)胞凋亡的機(jī)制。方法以腺相關(guān)病毒（AAV）為載體搭載CRISPR/Cas9系統(tǒng),注射1μL AAV病毒混合液（3×1013 vg/mL）于出生14 d小鼠視網(wǎng)膜中,對(duì)Spata7基因進(jìn)行視網(wǎng)膜內(nèi)特異性敲除。1個(gè)月后行視網(wǎng)膜眼底照相觀察AAV感染效率;定量PCR測(cè)定敲除效率;視覺電生理檢測(cè)光感受器細(xì)胞功能;免疫熒光實(shí)驗(yàn)探究Spata7基因功能。結(jié)果 AAV有效搭載CRISPR/Cas9系統(tǒng)進(jìn)入視網(wǎng)膜內(nèi)并對(duì)Spata7基因進(jìn)行敲除,敲除效率為54%。小鼠光感受器細(xì)胞大量死亡,導(dǎo)致整體光感受器細(xì)胞功能明顯下降。敲除后,視紫紅質(zhì)無(wú)法被轉(zhuǎn)運(yùn)到光感受器細(xì)胞外節(jié),引起明顯的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。結(jié)論 Spata7基因敲除導(dǎo)致視紫紅質(zhì)蛋白運(yùn)輸?shù)酵夤?jié)受阻而停留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng),并造成內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,是導(dǎo)致光感受器細(xì)胞大量死亡的重要原因。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,49(12)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

視網(wǎng)膜下腔注射1個(gè)月后實(shí)驗(yàn)組小鼠眼底照相檢查結(jié)果

GFP與Cas9蛋白的免疫熒光染色結(jié)果

圖4 GFP與Cas9蛋白的免疫熒光染色結(jié)果本研究對(duì)Spata7基因視網(wǎng)膜內(nèi)敲除1個(gè)月后光感受器細(xì)胞的死亡機(jī)制進(jìn)行了探討。結(jié)果顯示，RHO在實(shí)驗(yàn)組小鼠AAV注射眼光感受器細(xì)胞內(nèi)節(jié)中呈高表達(dá)，提示RHO滯留在光感受器細(xì)胞ER內(nèi)。ER應(yīng)激標(biāo)記蛋白CHOP在小鼠AAV注射眼光感受器細(xì)胞內(nèi)節(jié)中高表達(dá)，意味著RHO在ER內(nèi)的聚集引發(fā)了ER應(yīng)激。說明視網(wǎng)膜內(nèi)敲除Spata7基因后，RHO不能被轉(zhuǎn)運(yùn)到光感受器細(xì)胞外節(jié)，而停留在了ER，造成了ER應(yīng)激，導(dǎo)致光感受器細(xì)胞凋亡。


本文編號(hào)：3554669