將體長(zhǎng)5～7 cm的虎皮魚飼養(yǎng)在30 L的養(yǎng)殖缸中,每缸30尾。水溫自27℃起,每24 h降溫4℃,第4 d再降溫2℃,即各試驗(yàn)組的水溫分別為23、19、15、13℃,對(duì)照組水溫保持27℃。每組3個(gè)平行。每組水溫維持24 h后,每缸隨機(jī)取3尾魚,用間氨基苯甲酸乙脂甲磺酸鹽溶液麻醉后,解剖腦、鰓、肝臟和肌肉組織,液氮速凍,-80℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆�。利用CODEHOP軟件設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物,PCR擴(kuò)增到一段虎皮魚硬脂酰輔酶A去飽和酶（SCD）基因（PtScd1基因）保守序列,用RACE克隆和序列拼接獲得PtScd1基因cDNA序列。試驗(yàn)結(jié)果顯示,PtScd1基因cDNA序列全長(zhǎng)1338 bp,ORFfinder預(yù)測(cè)開放閱讀框長(zhǎng)度981個(gè)核苷酸,編碼326個(gè)氨基酸。根據(jù)保守結(jié)構(gòu)域數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)PtSCD1蛋白氨基酸序列含有高度保守的脂肪酸去飽和酶結(jié)構(gòu)域,Swiss-Model同源建模發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)存在2個(gè)高度保守的鋅離子結(jié)合位點(diǎn)（可能與雙鐵離子結(jié)合）,2個(gè)配體結(jié)合位點(diǎn),但是其序列保守性很差。PtSCD1蛋白可能在脂肪酸鏈delta9位置引入雙鏈,催化生成單不飽和脂肪酸。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)... 

【文章來(lái)源】：水產(chǎn)科學(xué). 2020,39(06)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

虎皮魚梯度低溫脅迫與取樣流程

Swiss-Model同源建模發(fā)現(xiàn),PtSCD1蛋白與4ymk.1.A(PDB,2019-08-02)序列同源性高達(dá)63.34%,屬于單體蛋白,序列相似性為0.5,比對(duì)范圍氨基酸序列第6～326位,覆蓋度95%,序列比對(duì)表明,其蛋白功能為酰基輔酶A去飽和酶1。根據(jù)其三維結(jié)構(gòu)(圖4),預(yù)測(cè)PtSCD1蛋白有2個(gè)高度保守的鋅離子結(jié)合位點(diǎn),有2個(gè)配體結(jié)合位點(diǎn),分別和硬脂酰輔酶A(ST9)、(Z)-十八碳-9-羥基-(2R)-2,3-二氧氮自由基丙酸(MPG)結(jié)合,但是這2個(gè)配體的結(jié)合位點(diǎn)序列保守性很差。圖3 蛋白質(zhì)保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)結(jié)果

蛋白質(zhì)保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]虎皮魚熱激蛋白PtHsp70基因序列與低溫表達(dá)分析[J]. 劉麗麗,王曉雯,朱建亞,張蓉,朱華,田照輝.  水產(chǎn)科學(xué). 2019(06)
[2]魚類低溫耐受機(jī)制與功能基因研究進(jìn)展[J]. 劉麗麗,朱華,閆艷春,王曉雯,張蓉,朱建亞.  生物技術(shù)通報(bào). 2018(08)
[3]硬脂酰輔酶A去飽和酶基因結(jié)構(gòu)功能、調(diào)控因子及在魚類上的研究進(jìn)展[J]. 馬昕羽,強(qiáng)俊,徐跑,何杰.  江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(12)
[4]建鯉兩種Δ6脂肪酸去飽和酶基因克隆與表達(dá)[J]. 任洪濤,俞菊華,徐跑,唐永凱,李紅霞,李建林.  中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2012(07)

碩士論文
[1]吉富羅非魚硬脂酰輔酶A去飽和酶（SCD）基因的克隆及溫度與飼料脂肪源對(duì)其表達(dá)的研究[D]. 馬昕羽.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]大黃魚硬脂酰輔酶A去飽和酶-1（SCD1）基因的克隆與鑒定及在低溫條件下對(duì)膜流動(dòng)性影響[D]. 劉浩.浙江海洋學(xué)院 2015



本文編號(hào)：3549204