結(jié)直腸癌已成為國內(nèi)外最常見的惡性腫瘤之一,多種復(fù)雜的分子機(jī)制參與直腸癌的發(fā)生發(fā)展,導(dǎo)致其缺少有效的靶向藥物和新的生物標(biāo)志物,近年來細(xì)胞遷移誘導(dǎo)的透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(CEMIP)在多種惡性腫瘤細(xì)胞中均被證實(shí)異常高表達(dá)且參與細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移,CEMIP在結(jié)直腸癌中雖有多項(xiàng)研究報(bào)道,但其作用機(jī)制仍未有明確的定論,因此本課題假設(shè)CEMIP通過多條信號(hào)通路調(diào)控結(jié)直腸癌細(xì)胞的生物學(xué)行為,為證明該假設(shè)我們擬通過構(gòu)建CEMIP下調(diào)的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系,分別從分子水平和蛋白水平初步揭示CEMIP介導(dǎo)EMT信號(hào)通路和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)通路調(diào)控結(jié)腸癌細(xì)胞的生物學(xué)行為,進(jìn)一步通過構(gòu)建荷瘤小鼠模型驗(yàn)證以上結(jié)論,再次明確CEMIP的作用機(jī)制和調(diào)控通路。我們的研究能夠?yàn)樯钊肓私饨Y(jié)直腸癌的疾病進(jìn)展機(jī)制和發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)志物提供理論依據(jù)。

【文章來源】： 吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【文章目錄】：
內(nèi)容提要
中文摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 前言
    1.2 綜述
        1.2.1 結(jié)直腸癌的研究進(jìn)展
        1.2.2 CEMIP分子結(jié)構(gòu)和功能
        1.2.3 CEMIP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與調(diào)控
        1.2.4 CEMIP與腫瘤
        1.2.5 總結(jié)
第2章 CEMIP在結(jié)直腸癌Wnt/β-catenin/Snail信號(hào)通路及上皮間充質(zhì)化轉(zhuǎn)化(EMT)中的作用
    2.1 材料與方法
        2.1.1 細(xì)胞系和細(xì)胞培養(yǎng)
        2.1.2 常規(guī)試劑和耗材
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)步驟
        2.2.1 細(xì)胞傳代
        2.2.2 質(zhì)粒構(gòu)建和轉(zhuǎn)染
        2.2.3 MTT增殖試驗(yàn)
        2.2.4 劃痕試驗(yàn)
        2.2.5 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 熒光定量PCR
        2.2.7 Westernblot
        2.2.8 免疫熒光染色
        2.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 在結(jié)直腸癌細(xì)胞系HCT116和SW480中構(gòu)建CEMIP降表達(dá)的穩(wěn)定細(xì)胞株
        2.3.2 沉默CEMIP后結(jié)直腸癌HCT116和SW480細(xì)胞的增殖能力受到抑制
        2.3.3 CEMIPshRNA減弱了結(jié)直腸癌HCT116和SW480細(xì)胞的遷移能力
        2.3.4 CEMIPshRNA抑制了結(jié)直腸癌HCT116和SW480細(xì)胞的體外侵襲能力
        2.3.5 CEMIPshRNA抑制了結(jié)直腸癌HCT116和SW480細(xì)胞EMT的轉(zhuǎn)換進(jìn)程
        2.3.6 沉默CEMIP能夠抑制結(jié)直腸癌HCT116和SW480細(xì)胞中間質(zhì)標(biāo)志物的表達(dá)但上調(diào)上皮細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)
        2.3.7 CEMIPshRNA能夠抑制結(jié)直腸癌HCT116和SW480細(xì)胞中的Wnt/β-catenin/Snail信號(hào)通路
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
第3章 CEMIP對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響及在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中的作用機(jī)制研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 細(xì)胞系和細(xì)胞培養(yǎng)
        3.1.2 常規(guī)試劑和耗材
        3.1.3 主要儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)步驟
        3.2.1 細(xì)胞傳代培養(yǎng)
        3.2.2 MTT檢測(cè)
        3.2.3 克隆形成試驗(yàn)
        3.2.4 細(xì)胞周期
        3.2.5 Westernblot
        3.2.6 構(gòu)建動(dòng)物模型
        3.2.7 HE染色
        3.2.8 TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)
        3.2.9 免疫組織化學(xué)染色
        3.2.10 細(xì)胞凋亡試驗(yàn)
        3.2.11 qRT-PCR
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 CEMIPshRNA-1和shRNA-2抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞中內(nèi)源性CEMIP的表達(dá)
        3.3.2 沉默CEMIP后結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖能力受損
        3.3.3 CEMIPshRNA抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的克隆形成
        3.3.4 CEMIPshRNA誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞周期阻滯在G1期
        3.3.5 下調(diào)CEMIP能夠抑制移植瘤小鼠的腫瘤生長
        3.3.6 下調(diào)CEMIP能夠誘導(dǎo)移植瘤小鼠腫瘤細(xì)胞的凋亡
        3.3.7 沉默CEMIP后的移植瘤小鼠腫瘤細(xì)胞中CEMIP表達(dá)降低.
        3.3.8 沉默CEMIP降低了移植瘤小鼠腫瘤細(xì)胞中GRP78蛋白的表達(dá)水平
        3.3.9 CEMIPshRNA誘導(dǎo)了結(jié)直腸癌細(xì)胞的凋亡表達(dá)
        3.3.10 CEMIPshRNA下調(diào)了未折疊蛋白反應(yīng)(unfoldedproteinresponse,UPR)相關(guān)蛋白的表達(dá)
        3.3.11 CEMIPshRNA促進(jìn)了TG-誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡
        3.3.12 CEMIPshRNA增加了TG-誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡蛋白的表達(dá)
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
第4章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介及已在學(xué)期間取得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]結(jié)直腸癌精準(zhǔn)醫(yī)療的研究現(xiàn)狀[J]. 俞�；�,王磊.  中華實(shí)驗(yàn)外科雜志. 2017 (01)
[3]結(jié)直腸癌篩查現(xiàn)狀 [J]. 李聰.  廣東醫(yī)學(xué). 2016(22)
[4]Single-incision laparoscopic colorectal surgery for cancer: State of art [J]. Fabio Cianchi,Fabio Staderini,Benedetta Badii.  World Journal of Gastroenterology. 2014(20)
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本文編號(hào)：3541566