目的:乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）感染是肝癌發(fā)生的重要危險因素,但其如何導致肝癌發(fā)生尚不清楚,目前認為由乙型肝炎病毒X基因編碼的蛋白（HBx）在其中起著關(guān)鍵作用。當慢性乙型肝炎患者病情急性加重時,白細胞介素6（Interleukin-6,IL-6）水平上升,激活下游相關(guān)信號通路,促進肝癌的發(fā)生發(fā)展。其中IL-6/STAT3信號通路至關(guān)重要,其異常激活能促進卵巢癌、肺癌、前列腺癌、結(jié)直腸癌等惡性腫瘤中某些干性基因的表達,但其是否促進肝癌發(fā)展的機制尚不明確。本研究擬通過探索HBx對IL-6/STAT3通路的調(diào)控作用,及其二者與干性基因表達之間的關(guān)系,證明IL-6是驅(qū)動乙型肝炎病毒相關(guān)性肝癌的內(nèi)在細胞因子,為今后靶向IL-6治療肝癌提供理論依據(jù)。方法:將攜帶HBx基因的慢病毒感染肝癌細胞HLE,以獲得穩(wěn)定表達HBx的HLE細胞（HLE-HBx）。以HLE細胞作為對照,分別使用PCR、Western Blot、MTT、Transwell和細胞劃痕實驗檢測HLE-HBx中HBx和IL-6的表達豐度、IL-6、IL-6R、STAT3和p-STAT3蛋白水平、對5-氟尿... 

【文章來源】：海南醫(yī)學院海南省

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

HLE-HBx細胞株的建立GAPDH

HBx 對肝癌細胞惡性行為的影響1 HBx 促進肝癌細胞的耐藥性為了驗證 HBx 對肝癌細胞耐藥性的影響，我們選用了一種常用的經(jīng)典 5-氟尿嘧啶（5-FU），將 5-FU 稀釋為不同濃度（0、40、80、160、3 μmol/L），作用 HLE 細胞 24 h 后，根據(jù) MTT 比色法測定的 OD 值繪度 5-FU 對肝癌細胞 HLE 的生長的影響的柱狀圖，結(jié)果如圖 3.2 所示的 5-FU 對 HLE 肝癌細胞的增殖均有一定的抑制作用，在 5-FU 濃度為ol/L 和 640 μmol/L 時，HLE 細胞的增值率低于 50%；然后用 320 μmo μmol/L 5-FU 比較 HLE、HLE-GFP、HLE-HBx 三種細胞的生長抑制情如圖 3.3 所示，用這兩種濃度 5-FU 處理細胞，HLE-HBx 細胞的生長抑顯低于與 HLE、HLE-GFP，這說明 HBx 促進肝癌細胞 HLE 耐藥。

圖 3.3 比較 5-FU 作用下 HLE-HBx 生長抑制率的ol/L 5-FU 作用三種細胞 24 h 后，在波長 490 nm 處測得吸光值細胞 24 h 后,在波長 490 nm 處測得吸光值�？v坐標為細胞生長%）=（正常組吸光值-加藥細胞組吸光值)/正常組吸光值×100%，與 HLE 和 HLE-GFP 相比，** P＜0.01。進肝癌細胞的遷移 Transwell 實驗和細胞劃痕實驗兩種方法來驗證 HB移性的影響，用 HLE、HLE-GFP 和 HLE-HBx 三種細胞果如圖 3.4A 所示，較 HLE 和 HLE-GFP，過表達 HB細胞數(shù)明顯多于對照組，其遷移能力也高于其他兩組 HLE-HBx 三種細胞進行細胞劃痕實驗，結(jié)果如圖 3.4E 細胞的遷移性明顯高于 HLE 和 HLE-GFP，72 h 的愈

【參考文獻】：
期刊論文
[1]肝癌危險因素及早期診斷與篩查[J]. 李鵬,丁惠國.  中國實用內(nèi)科雜志. 2015(03)
[2]HBx蛋白生物學作用的研究進展[J]. 龔倩,何松.  世界華人消化雜志. 2010(34)



本文編號：3525020