通過(guò)RACE技術(shù)成功獲得中華鱉（Pelodiscus sinensis）Wnt4基因的cDNA全長(zhǎng)序列,并利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析了該基因在不同組織、胚胎不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)特征以及Wnt激動(dòng)劑（Wnt agonist 1）對(duì)其表達(dá)的影響。結(jié)果表明:中華鱉Wnt4基因cDNA全長(zhǎng)2 432 bp,開(kāi)放閱讀框?yàn)? 095 bp,編碼364個(gè)氨基酸。中華鱉Wnt4基因與海龜（Chelonia mydas）和三趾箱龜（Terrapene carolina triunguis）具有高度同源性。Wnt4基因在雌雄個(gè)體性腺中表達(dá)量最高,且雌性卵巢中表達(dá)水平顯著高于雄性精巢（P<0.05）。在胚胎不同發(fā)育時(shí)期（14～21期）雌雄性之間有明顯的表達(dá)差異（P<0.05）,推測(cè)其參與了中華鱉性別分化的過(guò)程。Wnt激動(dòng)劑能上調(diào)Wnt4基因的表達(dá)水平,此結(jié)果為中華鱉性別分化機(jī)制的研究提供了參考。 

【文章來(lái)源】：海洋漁業(yè). 2020,42(06)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：11 頁(yè)

【部分圖文】：

中華鱉 Wnt4 基因

表1 中華鱉 Wnt4 基因擴(kuò)增引物信息Tab.1 Information of primers for Wnt4 amplification in Pelodiscus sinensis 引物 Primer 序列(5′-3′) Sequence (5′-3′) 功能 Application Wnt4-CF GAGGTGATGGACTCGGTGCG 保守區(qū) Wnt4-CR CCCGTTCTTGAGGTCGTGGTC Wnt4-3′-GSP AAAGTGCTGGTGCCGAAAAAC 3′RACE Wnt4-3′-NGSP TTCAAACCACACACGGATGAGGAC Wnt4-5′-GSP CCACTGGAAGCCCTGGGGACTGACC 5′RACE M13-47 CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC 菌落 PCR M13-48 CTAATACGACTCACTATAGGGCAA UPM CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT RACE 引物 UPM short CTAATACGACTCACTATAGGGC Wnt4-F GAGGTGATGGACTCGGTGCG 熒光定量 PCR Wnt4-R CCCGTTCTTGAGGTCGTGGTC 18sRNA-F AAAGGAATTGACGGAAGGGCAC 內(nèi)參基因 18sRNA-R GCTCCACCAACTAAGAACGG中華鱉 Wnt4蛋白與海龜、三趾箱龜、美洲短吻鱷、裸鼢鼠、人、小鼠、斑馬魚(yú)、牙鲆、半滑舌鰨、櫛孔扇貝和厚殼貽貝等 11 個(gè)物種的蛋白序列多重比較分析見(jiàn)圖 2,其序列比較保守,與其他物種有 100 多個(gè) Wnt 保守位點(diǎn)。

表2 不同物種與中華鱉Wnt4蛋白氨基酸序列同源性比對(duì)Tab.2 Comparative identity of amino acid sequence of Wnt4 物種 Species 登錄號(hào) Accession number 同源性 Identity 海龜 Chelonia mydas XP_027684015.1 91.74% 三趾箱龜 Terrapene carolina triunguis XP_024064527.1 91.74% 美洲短吻鱷 Alligator mississippiensis KYO 30022.1 89.17% 達(dá)馬拉鼴鼠Fukomys damarensis KFO 32560.1 86.69% 裸鼢鼠 Heterocephalus glaber EHB 08913.1 86.69% 人 Homo sapiens BAC 23080.1 83.76% 小鼠 Mus musculus AAI 01963.1 83.48% 斑馬魚(yú) Danio rerio AAA 96518.1 81.77% 牙鲆 Paralichthys olivaceus AGT 18276.1 81.77% 半滑舌鰨 Cynoglossus semilaevis AIJ 01347.1 80.91% 櫛孔扇貝 Azumapecten farreri AFU 35435.1 67.47% 厚殼貽貝 Mytilus coruscus APJ 36641.1 65.09%圖3 不同物種 Wnt4 蛋白氨基酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]EsWnt-4基因的表達(dá)分析[J]. 劉志強(qiáng),馮建彬,邱高峰.  海洋漁業(yè). 2019(02)
[2]飼料蛋白質(zhì)和脂肪水平對(duì)中華鱉生長(zhǎng)性能、肌肉質(zhì)構(gòu)指標(biāo)及肝臟相關(guān)基因表達(dá)的影響[J]. 吳凡,陸星,文華,田娟,劉偉,蔣明,楊長(zhǎng)庚,喻麗娟,梁宏偉.  淡水漁業(yè). 2018(01)
[3]中華鱉實(shí)時(shí)定量PCR內(nèi)參基因的篩選與評(píng)價(jià)[J]. 劉文婷,張貝貝,張耀紅,管越強(qiáng).  內(nèi)蒙古大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2017(05)
[4]三個(gè)不同品系中華鱉形態(tài)差異分析[J]. 梁宏偉,曹力歡,李翔,童苗苗,蔣業(yè)林,李忠,羅相忠,鄒桂偉.  淡水漁業(yè). 2017(04)
[5]厚殼貽貝Wnt4基因時(shí)空表達(dá)[J]. 徐躍峰,李一峰,梁簫,陳芋如,楊金龍.  水產(chǎn)學(xué)報(bào). 2016(10)
[6]長(zhǎng)牡蠣（Crassostrea gigas）Wnt4基因cDNA克隆與表達(dá)分析[J]. 楊梅,許飛,劉俊,李莉,張國(guó)范.  海洋與湖沼. 2015(01)
[7]櫛孔扇貝wnt4基因cDNA克隆及表達(dá)分析[J]. 李海龍,劉建國(guó),劉曉玲,張志峰.  中國(guó)水產(chǎn)科學(xué). 2013(02)

碩士論文
[1]黃河鯉Wnt4基因的克隆、表達(dá)模式分析和Wnt信號(hào)通路基因的結(jié)構(gòu)及功能分析[D]. 姬曉琳.河南師范大學(xué) 2016
[2]波紋唇魚(yú)性別發(fā)育候選基因的克隆與表達(dá)研究[D]. 黃飛.海南大學(xué) 2014
[3]中華鱉性腺分化及溫度對(duì)其影響[D]. 李慧君.河北大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3491461