植物谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GSTs）在正常生長條件下的細(xì)胞代謝以及由于重金屬脅迫所帶來的解毒過程中,都發(fā)揮著重要作用。為了進(jìn)一步研究BvGST基因在能源甜菜鎘逆境脅迫中的功能,本研究利用RT-PCR的方法,從能源甜菜體內(nèi)克隆獲得了Beta vulgaris glutathione S-transferase（BvGST,LOC104898671）基因。利用酵母表達(dá)載體構(gòu)建pYES2-BvGST重組質(zhì)粒,并轉(zhuǎn)化到酵母InVSc1中。SqRT-PCR結(jié)果表明,與內(nèi)參基因ACT1相比,BvGST基因可以受到半乳糖的誘導(dǎo)從而適量表達(dá)。當(dāng)施加0.5 mmol/L CdCl2逆境脅迫后,適量表達(dá)BvGST重組菌的生長狀態(tài)和趨勢要明顯優(yōu)于對照菌株（轉(zhuǎn)化pYES2的酵母）,并具有相對更高的Cd耐受性。因此可以推斷,能源甜菜BvGST基因在鎘逆境脅迫過程中發(fā)揮著重要的作用,并有可能通過GST介導(dǎo)的氧化逆境的活性解毒,從而參與到細(xì)胞對重金屬鎘離子的代謝平衡調(diào)控過程中。 

【文章來源】：中國糖料. 2020,42(04)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

能源甜菜BvGST基因的克隆

提取酵母pYES2質(zhì)粒，利用限制性內(nèi)切酶BamHI和Xho I將pYES2質(zhì)粒和pEASY-T1-BvGST質(zhì)粒進(jìn)行酶切，得到帶有特異性連接的粘性末端的載體和目的片段（圖2-A）。膠回收目的條帶，通過T4連接酶過夜連接以及大腸桿菌轉(zhuǎn)化，所獲得的的Amp抗性克隆的質(zhì)粒DNA經(jīng)過BamHI以及Xho I的雙酶切鑒定，分別在5.9 kb和642 bp左右的位置獲得了相應(yīng)的目的條帶，從而獲得正確的酵母重組質(zhì)粒pYES2-BvGST（圖2-B）。將陽性克隆轉(zhuǎn)入酵母InVSc1中以進(jìn)行下一步的檢測及功能分析。2.3 BvGST基因在酵母體內(nèi)的表達(dá)

為了進(jìn)一步檢測重組質(zhì)粒pYES2-BvGST在酵母InVSc1中的表達(dá)情況，實(shí)驗(yàn)將重組菌培養(yǎng)于誘導(dǎo)型培養(yǎng)基YPGDR中，適量誘導(dǎo)表達(dá)目的基因BvGST，以酵母ACT1基因作為內(nèi)參基因。Semi-quantitative PCR研究表明，經(jīng)過半乳糖的誘導(dǎo)，隨著培養(yǎng)時間的增加，與酵母ACT1基因的表達(dá)幾乎沒有變化相比，BvGST基因的表達(dá)量卻在逐漸增加（圖3），從而實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了甜菜BvGST基因在重組酵母菌體內(nèi)可以被誘導(dǎo)并正確地表達(dá)。2.4 鎘脅迫下甜菜BvGST基因在酵母體內(nèi)的功能分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鎘逆境脅迫下甜菜BvHIPP24基因在大腸桿菌的功能分析[J]. 魯振強(qiáng),王錦霞,董大鵬,張司揚(yáng),劉大麗.  中國糖料. 2019(04)
[2]甜菜BvMTP11基因的克隆及序列分析[J]. 王錦霞,李碩,代春艷,馬龍彪,劉大麗.  中國糖料. 2019(03)



本文編號：3469046