玫瑰RrSLF基因的克
發(fā)布時間：2021-10-25 00:12
玫瑰（Rosa rugosa）是我國傳統(tǒng)名花。研究發(fā)現(xiàn),玫瑰自交不親和機制與杏（Armeniaca vulgaris Lam.）、梨（Pyrus spp）等薔薇科植物的自交不親和機制相同,都屬于S-RNase參與的配子體自交不親和。植物S基因（包括花柱S-RNase基因和花粉SLF基因）控制了自交不親和現(xiàn)象,對花粉SLF基因的研究是探索配子體自交不親和（GSI）機制的關鍵之一。本文運用RT-PCR結合RACE技術從玫瑰花粉中克隆得到一條玫瑰自交不親和基因RrSLF,分析了該基因的序列特征和生物信息學特性,并對其進行了亞細胞定位研究和熒光定量表達分析,為進一步深入研究玫瑰自交不親和機理奠定了基礎。主要研究結果如下:1.玫瑰RrSLF基因序列全長1236 bp,開放閱讀框1122bp,共編碼373個氨基酸。玫瑰RrSLF基因編碼蛋白:相對分子量為43706.15Da;理論等電點值PI=6.24;在343-741位含有F-box保守結構域;沒有信號肽切割位點,為非分泌蛋白;平均疏水性指數(shù)為0.716,為疏水性蛋白;無跨膜區(qū)存在;有21個Ser磷酸化位點,7個Thr酸磷化位點,7個Tyr氨酸磷...
【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省
【文章頁數(shù)】：59 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
pROKII-GFP結構
圖 3-1 玫瑰花柱總 RNA 電泳圖M:DL2000maker;1,2:RNA 條帶Fig. 3-1 Total RNA isolated from Rosa rugosa styleM: DL2000maker;1,2:RNA bands間片段、3′-RACE 和 5′-RACE 克隆并引物 F1、R1，擴增得到大約 401接至 pMD18-T 載體，轉化大腸桿菌CR 驗證合格后送北京華大公司測序，列與杏、野草莓和扁桃的 SLF 基因計引物分別進行 3′-RACE 和 5′-RRACE 序列片段，3′-RACE 序列長度RACE 和 5′-RACE PCR 產(chǎn)物分別切態(tài)細胞，挑取陽性克隆，培養(yǎng)過夜，測序序列分別在 NCBI 網(wǎng)站上比對，結
M:DL2000maker;1,2:RNA 條帶Fig. 3-1 Total RNA isolated from Rosa rugosa styleM: DL2000maker;1,2:RNA bands.2 玫瑰 RrSLF 基因中間片段、3′-RACE 和 5′-RACE 克隆根據(jù)保守序列設計簡并引物 F1、R1，擴增得到大約 401bp 大小的中間片段。PCR 產(chǎn)物切膠回收后鏈接至 pMD18-T 載體，轉化大腸桿菌感受態(tài)細胞，挑取陽培養(yǎng)過夜，經(jīng)菌液 PCR 驗證合格后送北京華大公司測序，將測序序列在 NCBI 對，結果顯示所得序列與杏、野草莓和扁桃的 SLF 基因序列一致性達 66%-73中間片段序列及所設計引物分別進行 3′-RACE 和 5′-RACE 擴增，獲得該基 3′-RACE 和 5′-RACE 序列片段，3′-RACE 序列長度為 751bp，5′-RAC度為 267bp，將 3′-RACE 和 5′-RACE PCR 產(chǎn)物分別切膠回收后連接至 pMD，轉化大腸桿菌感受態(tài)細胞，挑取陽性克隆，培養(yǎng)過夜，經(jīng)菌液 PCR 驗證合京華大公司測序，將測序序列分別在 NCBI 網(wǎng)站上比對，結果顯示 3′-RACE 和CE 序列與扁桃、杏和日本櫻的 SLF 基因序列一致性達 61%-71%（圖 3-2）。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]果樹自交不親和SFB與S-RNase作用分子機制研究進展[J]. 楊芩,付燕. 中國果樹. 2015(02)
[2]玫瑰與月季種間雜交障礙原因分析[J]. 于曉艷,邢樹堂,趙蘭勇. 中國農(nóng)業(yè)科學. 2014(15)
[3]薔薇科果樹自交不親和性分子機制研究進展[J]. 張紹鈴,吳巨友,吳俊,齊永杰,高永彬. 南京農(nóng)業(yè)大學學報. 2012(05)
[4]葡萄赤霉素合成相關基因克隆、亞細胞定位和表達分析[J]. 王西成,任國慧,房經(jīng)貴,李阿英,劉洪,吳偉民,趙密珍. 中國農(nóng)業(yè)科學. 2012(11)
[5]鹽穗木HcGKR基因亞細胞定位表達載體的構建及定位分析[J]. 郝曉燕,張毓露,足木熱木,危曉薇,邵琳,陳果,黃全生. 新疆農(nóng)業(yè)科學. 2012(02)
[6]Identification of a Ubiquitin-Binding Structure in the S-Locus F-Box Protein Controlling S-RNase-Based Self-Incompatibility[J]. Guang Chen~(a,b,c,1),Bin Zhang~(a,b,c,1),Lijing Liu~(b,c),Qun Li~a,Yu’e Zhang~a, Qi Xie~b,Yongbiao Xue~(a,*) a State Key Laboratory of Molecular Developmental Biology,Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences and National Center for Plant Gene Research,Beijing 100101,China b State Key Laboratory of Plant Genomics,Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences and National Center for Plant Gene Research,Beijing 100101,China cGraduate University of Chinese Academy of Sciences,Beijing 100190,China. 遺傳學報. 2012(02)
[7]鹽脅迫對玫瑰生長和生理特性的影響[J]. 楊志瑩,趙蘭勇,徐宗大. 應用生態(tài)學報. 2011(08)
[8]玫瑰果實生長動態(tài)研究[J]. 劉平,趙蘭勇,孫曰波,劉張璐. 山東農(nóng)業(yè)科學. 2010(01)
[9]中國野生玫瑰種質資源調(diào)查及其形態(tài)變異研究[J]. 馮立國,邵大偉,生利霞,趙蘭勇,于曉艷. 山東農(nóng)業(yè)大學學報(自然科學版). 2009(04)
[10]玫瑰花航天育種技術研究[J]. 孟憲水,呂傳潤,董桂芝,丁剛,張靜菊. 山東林業(yè)科技. 2009(05)
博士論文
[1]梨自交親和性變異的分子機理研究[D]. 吳華清.南京農(nóng)業(yè)大學 2006
本文編號：3456275
【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學山東省
【文章頁數(shù)】：59 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
pROKII-GFP結構
圖 3-1 玫瑰花柱總 RNA 電泳圖M:DL2000maker;1,2:RNA 條帶Fig. 3-1 Total RNA isolated from Rosa rugosa styleM: DL2000maker;1,2:RNA bands間片段、3′-RACE 和 5′-RACE 克隆并引物 F1、R1，擴增得到大約 401接至 pMD18-T 載體，轉化大腸桿菌CR 驗證合格后送北京華大公司測序，列與杏、野草莓和扁桃的 SLF 基因計引物分別進行 3′-RACE 和 5′-RRACE 序列片段，3′-RACE 序列長度RACE 和 5′-RACE PCR 產(chǎn)物分別切態(tài)細胞，挑取陽性克隆，培養(yǎng)過夜，測序序列分別在 NCBI 網(wǎng)站上比對，結
M:DL2000maker;1,2:RNA 條帶Fig. 3-1 Total RNA isolated from Rosa rugosa styleM: DL2000maker;1,2:RNA bands.2 玫瑰 RrSLF 基因中間片段、3′-RACE 和 5′-RACE 克隆根據(jù)保守序列設計簡并引物 F1、R1，擴增得到大約 401bp 大小的中間片段。PCR 產(chǎn)物切膠回收后鏈接至 pMD18-T 載體，轉化大腸桿菌感受態(tài)細胞，挑取陽培養(yǎng)過夜，經(jīng)菌液 PCR 驗證合格后送北京華大公司測序，將測序序列在 NCBI 對，結果顯示所得序列與杏、野草莓和扁桃的 SLF 基因序列一致性達 66%-73中間片段序列及所設計引物分別進行 3′-RACE 和 5′-RACE 擴增，獲得該基 3′-RACE 和 5′-RACE 序列片段，3′-RACE 序列長度為 751bp，5′-RAC度為 267bp，將 3′-RACE 和 5′-RACE PCR 產(chǎn)物分別切膠回收后連接至 pMD，轉化大腸桿菌感受態(tài)細胞，挑取陽性克隆，培養(yǎng)過夜，經(jīng)菌液 PCR 驗證合京華大公司測序，將測序序列分別在 NCBI 網(wǎng)站上比對，結果顯示 3′-RACE 和CE 序列與扁桃、杏和日本櫻的 SLF 基因序列一致性達 61%-71%（圖 3-2）。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]果樹自交不親和SFB與S-RNase作用分子機制研究進展[J]. 楊芩,付燕. 中國果樹. 2015(02)
[2]玫瑰與月季種間雜交障礙原因分析[J]. 于曉艷,邢樹堂,趙蘭勇. 中國農(nóng)業(yè)科學. 2014(15)
[3]薔薇科果樹自交不親和性分子機制研究進展[J]. 張紹鈴,吳巨友,吳俊,齊永杰,高永彬. 南京農(nóng)業(yè)大學學報. 2012(05)
[4]葡萄赤霉素合成相關基因克隆、亞細胞定位和表達分析[J]. 王西成,任國慧,房經(jīng)貴,李阿英,劉洪,吳偉民,趙密珍. 中國農(nóng)業(yè)科學. 2012(11)
[5]鹽穗木HcGKR基因亞細胞定位表達載體的構建及定位分析[J]. 郝曉燕,張毓露,足木熱木,危曉薇,邵琳,陳果,黃全生. 新疆農(nóng)業(yè)科學. 2012(02)
[6]Identification of a Ubiquitin-Binding Structure in the S-Locus F-Box Protein Controlling S-RNase-Based Self-Incompatibility[J]. Guang Chen~(a,b,c,1),Bin Zhang~(a,b,c,1),Lijing Liu~(b,c),Qun Li~a,Yu’e Zhang~a, Qi Xie~b,Yongbiao Xue~(a,*) a State Key Laboratory of Molecular Developmental Biology,Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences and National Center for Plant Gene Research,Beijing 100101,China b State Key Laboratory of Plant Genomics,Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences and National Center for Plant Gene Research,Beijing 100101,China cGraduate University of Chinese Academy of Sciences,Beijing 100190,China. 遺傳學報. 2012(02)
[7]鹽脅迫對玫瑰生長和生理特性的影響[J]. 楊志瑩,趙蘭勇,徐宗大. 應用生態(tài)學報. 2011(08)
[8]玫瑰果實生長動態(tài)研究[J]. 劉平,趙蘭勇,孫曰波,劉張璐. 山東農(nóng)業(yè)科學. 2010(01)
[9]中國野生玫瑰種質資源調(diào)查及其形態(tài)變異研究[J]. 馮立國,邵大偉,生利霞,趙蘭勇,于曉艷. 山東農(nóng)業(yè)大學學報(自然科學版). 2009(04)
[10]玫瑰花航天育種技術研究[J]. 孟憲水,呂傳潤,董桂芝,丁剛,張靜菊. 山東林業(yè)科技. 2009(05)
博士論文
[1]梨自交親和性變異的分子機理研究[D]. 吳華清.南京農(nóng)業(yè)大學 2006
本文編號：3456275
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