【目的】昆蟲海藻糖酶能夠調(diào)控幾丁質(zhì)代謝并控制蛻皮過程。本研究通過TRE表達(dá)被抑制后,檢測褐飛虱（Nilaparvata lugens）蛻皮狀況、幾丁質(zhì)含量及幾丁質(zhì)合成酶（chitin synthase,CHS）和幾丁質(zhì)酶（chitinase,Cht）基因表達(dá)情況,探究不同的海藻糖酶（trehalase,TRE）在褐飛虱表皮中對幾丁質(zhì)代謝的調(diào)控作用。【方法】采用RNAi技術(shù),以實驗室飼養(yǎng)種群褐飛虱為材料,通過向其體內(nèi)注射雙鏈RNA（dsRNA）分別抑制單個海藻糖酶基因或同時抑制多個海藻糖酶基因,注射48 h后通過Trizol法提取褐飛虱總RNA,反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成第一鏈DNA后采用實時熒光定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)檢測該基因的表達(dá)情況,確定RNAi效果。氫氧化鉀法測定48 h褐飛虱整體幾丁質(zhì)含量變化并對蛻皮困難蟲體進(jìn)行拍照;最后采用qRT-PCR檢測褐飛虱CHS和Cht在mRNA水平上的相對表達(dá)量變化,分析TRE在調(diào)控幾丁質(zhì)代謝中的作用�！窘Y(jié)果】與注射dsGFP相比較,其余各注射組褐飛虱整體幾丁質(zhì)含量顯著下降,其中dsTRE1混合注射組與Validamycin注射組呈極顯著下降,同時... 

【文章來源】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017,50(06)北大核心CSCD

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褐飛虱3個海藻糖酶基因表達(dá)被抑制后幾丁質(zhì)含量檢測及蛻皮情況

1052中國農(nóng)業(yè)科學(xué)50卷丁幾含質(zhì)量hitinContentc%)(圖2褐飛虱3個海藻糖酶基因表達(dá)被抑制后幾丁質(zhì)含量檢測及蛻皮情況Fig.2Thechitincontentdetectedandmoultingchangesafter3trehalasegenesexpressioninhibitedbythewayofRNAidsGFPdsTRE1-1dsTRE1-2dsTRE2dsTRE1sValidamycinA0.00.51.01.52.0*B0.00.20.40.60.81.01.21.41.6*C0.00.30.60.91.21.5表皮Cuticle相表達(dá)對量elatiRevxpreseiosn對相達(dá)量表elatRveixperseisno相表達(dá)對量elatiRevxpreseoniCHS1CHS1aCHS1b圖3褐飛虱3個海藻糖酶基因RNAi后幾丁質(zhì)合成酶及可變轉(zhuǎn)錄子在mRNA相對表達(dá)水平Fig.3TherelativeexpressionlevelofchitinsynthaseanditssplicingvariantsofN.lugensafter3trehalasegenesRNAi2.4TRE基因RNAi后幾丁質(zhì)酶基因表達(dá)變化dsTRE1-1注射后48h，Cht1、Cht3、Cht8和Cht10表達(dá)下降，其中與注射dsGFP組相比較僅Cht8表達(dá)顯著下降，其余6個Cht表達(dá)上升，且Cht2和Cht5顯著上升；dsTRE1-2注射組中，Cht1、Cht6和Cht8表達(dá)下降，Cht2和Cht4表達(dá)顯著上升；dsTRE2處理組中，Cht1、Cht8和Cht10表達(dá)下降，而Cht9表達(dá)顯著上升；dsTRE1s注射后，Cht1和Cht5表達(dá)顯著下降，而Cht9表達(dá)顯著上升；海藻糖酶抑制劑Validamycin注射組中所有的10個幾丁質(zhì)酶基因表達(dá)都顯著或極顯著下降。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)在4個TRE的dsRNA注射組中，Cht1和Cht8的表達(dá)下降，但并不是所有的處理組都顯著下降（圖4）。3討論RNAi是基因功能研究的有效工具，主要通過注射dsRNA或siRNA抑制基因的表達(dá)[25]。目前，RNAi技術(shù)已經(jīng)廣泛用于探索和研究昆蟲的相關(guān)基因功能，相關(guān)研究結(jié)果顯示當(dāng)昆

【參考文獻(xiàn)】：
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