目的研究微RNA-129-5p（miR-129-5p）靶向Fas相關死亡功能域蛋白（FADD）基因對人椎間盤髓核細胞（hNPC）凋亡的影響,并探討其作用機制。方法運用脂質體法將miR-219-5p抑制子轉染至hNPC中抑制miR-219-5p表達,將pcDNA-FADD轉染至hNPC中使FADD過表達,將miR-219-5p抑制子和FADD siRNA共轉染至hNPC中抑制miR-219-5p和FADD表達。采用流式細胞術檢測各組細胞凋亡率,蛋白質印跡法檢測抑制miR-219-5p表達后hNPC細胞中FADD、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、Bcl-2和Bax蛋白表達量。通過Targetscan軟件預測miR-129-5p和FADD靶向結合位點,采用雙熒光素酶報告基因實驗檢測二者的靶向關系。結果抑制miR-219-5p、過表達FADD均可明顯促進hNPC凋亡。Targetscan軟件預測發(fā)現(xiàn)FADD 3′-UTR上存在miR-219-5p的結合位點,雙熒光素酶報告基因實驗證實miR-129-5p和FADD具有靶向結合關系。抑制miR-219-5p的表達后,hNPC中FADD表... 

【文章來源】：脊柱外科雜志. 2020,18(03)

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【部分圖文】：

過表達FADD誘導hNPC凋亡

實時熒光定量PCR檢測結果顯示,anti-miR組hNPC中miR-129-5p的表達量與anti-miR-con組相比明顯降低(P < 0.05,圖1),表明miR-129-5p的表達被成功抑制。流式細胞術檢測結果顯示,與anti-miR-con組相比,anti-miR組hNPC的凋亡率明顯升高(P < 0.05,圖2)。蛋白質印跡分析結果顯示,與anti-miR-con組相比,anti-miR組hNPC中促凋亡相關蛋白活化型Caspase-3表達上調(P < 0.05),抑凋亡相關蛋白Bcl-2表達下調(P < 0.05),Bax蛋白表達量無明顯變化(圖3),結果表明抑制miR-129-5p表達能明顯促進hNPC凋亡。圖2 流式細胞術檢測抑制mi R-129-5p表達后h NPC的凋亡率

流式細胞術檢測抑制mi R-129-5p表達后h NPC的凋亡率

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]間充質干細胞來源外泌體促進椎間盤退變修復的作用及機制研究[D]. 徐辰.第二軍醫(yī)大學 2017
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碩士論文
[1]LncRNA在椎間盤退變過程中調控髓核細胞凋亡的功能及其機制研究[D]. 王毅峰.第二軍醫(yī)大學 2016
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本文編號：3449806