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非小細胞肺癌中MAGE-D4的表達、血清抗體分析及基因沉默細胞株的構建

發(fā)布時間:2021-10-21 09:39
  目的:檢測非小細胞肺癌組織中MAGE-D4蛋白的表達和血清中MAGE-D4抗體,并進一步分析它們與患者臨床病理指標之間的關系。構建MAGE-D4真核表達質粒,篩選基因穩(wěn)定沉默的肺癌細胞株,為后續(xù)研究MAGE-D4的生物學功能提供條件。方法:1.采用Oncomine癌基因芯片數(shù)據(jù)庫中兩個獨立的肺癌數(shù)據(jù)集Hou Lung(肺癌樣本91例,正常肺組織65例)和Okayama Lung(肺癌樣本226例,正常肺組織20例)分析MAGE-D4 mRNA的表達。2.通過免疫組織化學染色法檢測81例非小細胞肺癌組織和38例癌旁組織中MAGE-D4蛋白的表達及細胞定位,并分析蛋白表達的陽性率與NSCLC患者臨床病理參數(shù)之間的關系。3.采用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測74例非小細胞肺癌患者血清中MAGE-D4抗體的陽性率及效價,并分析其與NSCLC患者臨床病理參數(shù)的關系。4.通過RT-PCR檢測3株肺癌細胞A549、H460、PC9中MAGE-D4的表達情況。使用MAGE-D4 shRNA重組慢病毒感染高表達MAGE-D4的肺癌細胞,經(jīng)過嘌呤霉素篩選,獲得穩(wěn)定沉默MAGE-D4基因的細胞株;通過RT-qPCR和... 

【文章來源】:廣西醫(yī)科大學廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】:114 頁

【學位級別】:碩士

【部分圖文】:

非小細胞肺癌中MAGE-D4的表達、血清抗體分析及基因沉默細胞株的構建


肺癌組織芯片中MAGE-D4mRNA的表達Fig.1-1ExpressionofMAGE-D4mRNAinlungcancertissuemicroarray

免疫組織化學染色,蛋白


21圖 1-2 免疫組織化學染色檢測 MAGE-D4 蛋白(200×)Fig.1-2 MAGE-D4 protein expression tested by IHC(200×)a: negative control (paracancerous tissue);b: expression of pre-immune serum in lung adenocarcinoma ;c: co-expression in the nucleus and cytoplasm;d: weak expression in lung adenocarcinoma;e: moderateexpression in lung adenocarcinoma;f: strong expression in adenocarcinoma; g: weak expression in lungsquamous cell carcinoma; h: moderate expression in lung squamous cell carcinoma;i: strong expression inlung squamous cell carcinoma

標準曲線,標準曲線,決定系數(shù),樣本均數(shù)


S 17.0 軟件進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析,樣本均數(shù)的使用 χ2檢驗或 Fisher 確切概率法,檢驗水準學意義。的濃度測定 蛋白定量試劑盒測定包被蛋白濃度,標03,決定系數(shù) R2=0.9969(圖 2-1)。決定系數(shù)高的準確度,可用于計算包被蛋白的濃度。

【參考文獻】:
期刊論文
[1]自身抗體在腫瘤及感染性疾病發(fā)生、發(fā)展中的作用[J]. 王永福,劉媛.  北京大學學報(醫(yī)學版). 2018(06)
[2]血清NY-ESO-1自身抗體在乳腺癌中的診斷價值[J]. 謝長樂,羅育豪,黃旭純,許鎰洧.  轉化醫(yī)學雜志. 2018(03)
[3]黑色素瘤相關抗原MAGE-D研究進展[J]. 鄔慧賢,付駿,張慶梅,謝小薰.  廣東醫(yī)學. 2018(05)
[4]黑素瘤相關抗原D4(MAGE-D4)多克隆抗體的制備和應用[J]. 賀菽嘉,顧永耀,肖紹文,張慶梅,陳芳,羅彬,付駿,謝小薰.  細胞與分子免疫學雜志. 2017(01)
[5]MAGE-C2在肺腺癌中的表達及臨床意義[J]. 郭康,劉夢實,徐萍,李紅梅.  中國肺癌雜志. 2016(02)
[6]食管鱗癌組織中黑色素瘤相關抗原D4b的表達及臨床意義[J]. 吳靜,黃俊星,趙國軍,詹樹東,盧婷,周彤敏,于鴻.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學. 2015(15)
[7]轉錄因子E2F-1的研究進展[J]. 王長青,肖強.  中華腫瘤防治雜志. 2011(04)
[8]MAGE-D4a融合蛋白的原核表達、純化及鑒定[J]. 賀菽嘉,肖紹文,羅彬,藍秀萬,林文珍,林永達,謝小薰.  中國免疫學雜志. 2010(05)
[9]黑色素瘤抗原編碼基因家族新成員MAGE-D1的組織表達譜研究[J]. 張成崗,賀福初.  中國生物化學與分子生物學報. 2002(02)

博士論文
[1]膠質瘤相關抗原MAGE-D4基因重組、表達特性分析及抗體血清學檢測[D]. 賀菽嘉.廣西醫(yī)科大學 2010



本文編號:3448725

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