TGF-β/Smads信號通路在早期胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、細(xì)胞增殖與分化、凋亡和遷移、內(nèi)分泌和免疫等多種生理過程中扮演著重要的角色。研究表明,TGF-βs與細(xì)胞外基質(zhì)沉著有著密切的關(guān)系,并且是創(chuàng)傷愈合及瘢痕形成的主要因素之一。三角帆蚌是優(yōu)良的淡水育珠蚌,由于插核育珠環(huán)節(jié)對蚌造成嚴(yán)重?fù)p傷并影響育珠質(zhì)量,造成極大的經(jīng)濟損失,因此開展三角帆蚌TGF-β/smads信號通路的研究將有利于了解貝類的免疫及創(chuàng)傷修復(fù)機制,為其健康養(yǎng)殖提供理論基礎(chǔ)。1.根據(jù)前期構(gòu)建的三角帆蚌轉(zhuǎn)錄組文庫中篩選出Smad3及Smad4基因片段設(shè)計特異性引物,利用RACE-PCR技術(shù)成功克隆出了HcSmad3及HcSmad4基因的cDNA序列全長。HcSmad3的5’端非編碼區(qū)的大小為162bp,3’端非編碼區(qū)的大小為633bp,開放閱讀框為1257bp,共編碼418個氨基酸,包含兩個終止信號序列（AATAAA）以及一個PolyA尾巴,經(jīng)預(yù)測其理論的等電點為6.09,分子量大小為47.28 kDa。HcSmad4的5’UTR大小為119bp,3’UTR大小為876bp,開放閱讀框長度為1548bp編碼515個氨基酸,預(yù)測其理... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

TGF-β/smads信號通路機制[39]

圖 1.2 Smads 的結(jié)構(gòu)示意圖[39]Fig.1.2 Schematic diagram of Smads[39]1.3 TGF-β/Smad 研究進(jìn)展1.3.1 Smads 基因的亞細(xì)胞定位調(diào)控近年來的研究強調(diào)了 Smad 核質(zhì)穿梭在 TGF-β信號調(diào)控中的重要性,在未誘導(dǎo)的細(xì)胞中，Smad2 和 Smad3 主要分布在細(xì)胞質(zhì)中，而 Smad4 則分布在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中。然而，Smad 并不是靜止的，而是不斷地在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核之間穿梭[40-42]。在 TGF-β的刺激下，Smad 復(fù)合物在細(xì)胞核內(nèi)形成并積累，在那里它們可以停留數(shù)個小時，然而，詳細(xì)的研究表明，R-Smad 正以較低的速率被一種尚未確認(rèn)的磷酸酶持續(xù)地去磷酸化,這種去磷酸化使它們能夠與 Smad4 分離并被輸出到細(xì)胞質(zhì)中[40, 43]。如果受體仍然活躍，R-Smads 被再磷酸化，與 Smad4 形成復(fù)

2.3. 結(jié)果2.3.1 總RNA的提取三角帆蚌血細(xì)胞提取的總RNA結(jié)果電泳檢測圖如圖2.1所示，有5s，18s，28s三條明顯的條帶。紫外分光光度計檢測其A280/A260在1.8-2.0之間，表明提取的RNA的質(zhì)量較好。圖2.1 總RNA 檢測Fig.2.1 Total RNA detection2.3.2 三角帆蚌 HcSmad3 和 HcSmad4 基因全長的克隆根據(jù)構(gòu)建的三角帆蚌血細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組文庫篩選出了HcSmad3和HcSmad4基因片段，設(shè)計特異性引物 HcSmad3-F，HcSmad3-R 和 HcSmad4-F，HcSmad4-R 擴增其中間片段

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3443958