【方法】利用PCR方法對綿羊肺炎支原體（Mycoplasma ovipneumoniae,MO）新疆分離株MO-XJ p74基因進行擴增、克隆及測序,分析其分子特征。將P74蛋白抗原集中區(qū)編碼序列亞克隆至表達載體p ET-32a（+）,構建重組表達載體p ET-32a（+）-p74C,轉化至E.coli BL21（DE3）感受態(tài)細胞中,IPTG誘導表達�！窘Y果】MO-XJ p74基因全長2016 bp,編碼671個氨基酸;對編碼的氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn),該蛋白不含信號肽序列,9³1位氨基酸序列含有1個跨膜區(qū),有16個N-糖基化位點、7個N-�；稽c、17個酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位點及5個蛋白激酶C磷酸化位點。同源性分析顯示MO-XJ P74蛋白氨基酸序列與標準株MO-SC01氨基酸序列同源率為86.5%,其羧基端為P74蛋白抗原集中區(qū)。SDS-PAGE檢測結果顯示,表達的P74蛋白抗原表位集中區(qū)片段對分子質量約為35.5 k Da,與理論值相符;Western blot分析表明重組P74蛋白具有較強的反應原性�！窘Y論】本研究為進一步篩選MO亞單位疫苗及血清學診斷的候選抗... 

【文章來源】：西南農業(yè)學報. 2017,30(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株與試劑
    1.2 引物設計
    1.3 MO-XJ p74基因的擴增、克隆及測序鑒定
    1.4 p74基因及其編碼蛋白質生物信息學分析
    1.5 P74蛋白氨基酸序列同源性及遺傳進化分析
    1.6 p74基因編碼蛋白羧基端抗原集中區(qū)的擴增、克隆及鑒定
    1.7 原核表達載體構建
    1.8 目的蛋白的誘導表達及Western blot分析
2 結果與分析
    2.1 p74基因的擴增、克隆及測序鑒定
    2.2 p74基因核苷酸及編碼氨基酸序列分析
    2.3 P74蛋白氨基酸序列同源性及遺傳進化分析結果
    2.4 p74基因編碼蛋白羧基端抗原集中區(qū)的擴增、克隆及鑒定結果
    2.5 重組表達載體p ET-32a (+) -p74C構建與鑒定結果
    2.6 P74C蛋白的誘導表達結果
    2.7 表達產物Western blot鑒定結果
3 討論
4 結論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]綿羊肺炎支原體膜蛋白p56基因的克隆、表達及反應原性研究[J]. 陳誠,喬軍,孟慶玲,劉田莉,胡政香,馬玉,才學鵬,陳創(chuàng)夫.  西南農業(yè)學報. 2016(02)
[2]綿羊肺炎支原體p128基因序列分析及原核表達[J]. 馮旭飛,刀筱芳,張賢宇,李定霏,楊發(fā)龍.  中國獸醫(yī)雜志. 2015(02)
[3]綿羊肺炎支原體貴州分離株的鑒定[J]. 張雙翔,程振濤,周碧君,文明,王開功,李澤民,王慧,崔亞蘭,覃嵐,夏鵬.  西北農林科技大學學報(自然科學版). 2013(05)
[4]中國部分地區(qū)綿羊肺炎支原體的基因多態(tài)性分析[J]. 許健,儲岳峰,趙萍,高鵬程,賀英,剡根強,逯忠新.  畜牧獸醫(yī)學報. 2011(09)
[5]綿羊肺炎支原體兩分離株的藥物敏感實驗[J]. 陳宏偉,剡根強,張秀萍.  石河子大學學報(自然科學版). 2005(02)
[6]外源基因在大腸桿菌中的高效表達[J]. 廖美德,謝秋玲,林劍,洪岸,孫奮勇.  生命科學. 2002(05)
[7]一種由支原體感染的綿羊增生性間質性肺炎的研究[J]. 胡景韶,蔣學良,胡誠隆,張道永.  中國獸醫(yī)雜志. 1982(05)

碩士論文
[1]綿羊肺炎支原體新疆塔城流行株的分離鑒定及油佐劑滅活苗免疫原性初步研究[D]. 胡政香.石河子大學 2015
[2]綿羊肺炎支原體多表位疫苗的研究及免疫試驗[D]. 張軒.中國農業(yè)科學院 2013



本文編號：3438166