本研究利用CRSIPR/Cas9基因編輯技術,創(chuàng)制了NtabMYC2的不同的定點突變材料。針對NtabMYC2基因3個敲除靶位點,設計并成功構建了相應的載體。結果表明:3個載體轉(zhuǎn)化煙草后,通過測序驗證NtabMYC2基因被成功敲除了,統(tǒng)計3個載體的敲除成功率分別是24%、2%、10%;T0突變植株經(jīng)過自交重組產(chǎn)生T1代植株,通過測序分析T1代植株存在4種純合的NtabMYC2基因突變類型,其分別是多一個A、T、C插入突變和一個缺失4個堿基缺失突變。為進一步研究NtabMYC2基因在煙草中的功能提供了一定的參考價值。 

【文章來源】：分子植物育種. 2017,15(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 結果與分析
    1.1 Ntab MYC2基因靶位點序列驗證
    1.2 Ntab MYC2基因敲除載體構建
    1.3 Ntab MYC2轉(zhuǎn)基因煙株的檢測
    1.4 Ntab MYC2基因定點敲除序列檢測
    1.5 Ntab MYC2基因定點敲除材料的突變類型分析
2 討論
3 材料與方法
    3.1 材料和試劑
    3.2 材料處理
    3.3 煙草Ntab MYC2基因序列的來源
    3.4 p ORE-CRISPR/Cas9表達載體構建
    3.5 p ORE-CRISPR/Cas9表達載體的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化及煙草的遺傳轉(zhuǎn)化
    3.6 轉(zhuǎn)基因煙株篩選及Ntab MYC2基因突變位點的檢測


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Targeted Mutagenesis in Zea mays Using TALENs and the CRISPR/Cas System[J]. Zhen Liang,Kang Zhang,Kunling Chen,Caixia Gao.  Journal of Genetics and Genomics. 2014(02)



本文編號：3432744