植物甜蛋白是從植物種分離提取到的植物蛋白,由于甜蛋白甜度高、熱量低、比合成甜味劑安全,不會(huì)導(dǎo)致肥胖、安全無(wú)毒等優(yōu)點(diǎn)^[1],使得甜蛋白作為新型甜味劑,廣受青睞。本研究主要目的是探索MabinlinⅡ甜蛋白在原核生物中的表達(dá)以及檢測(cè)表達(dá)的蛋白的甜味。野生馬檳榔植株主要分布在云南和廣西等熱帶和亞熱帶地區(qū),由于地理氣候等自然原因,馬檳榔植株數(shù)量稀少,瀕危滅絕。本研究預(yù)期借助大腸桿菌表達(dá)載體,表達(dá)優(yōu)化過(guò)的MabinlinⅡ甜蛋白基因,探究甜蛋白是否能大量表達(dá)。為MabinlinⅡ甜蛋白的開(kāi)發(fā)提供一些理論基礎(chǔ)。目前MabinlinⅡ甜蛋白基因已經(jīng)能夠在大腸桿菌中表達(dá),為了進(jìn)一步提高表達(dá)量以及測(cè)定其甜味活性,在NCBI查詢得到MabinlinⅡ甜蛋白基因全長(zhǎng)序列,依據(jù)大腸桿菌對(duì)密碼子的利用率不同,將稀有密碼子置換為常用密碼子,對(duì)468 bp長(zhǎng)度的轉(zhuǎn)座酶密碼子進(jìn)行了優(yōu)化。本研究目的則是使用pET28a（+）作為克隆表達(dá)載體,E.coli BL21（DE3）作為表達(dá)菌,表達(dá)出密碼子優(yōu)化后的468 bp長(zhǎng)度MabinlinⅡPlus甜蛋白基因和去掉序列中編碼氨基酸的信號(hào)肽、N-端肽,... 

【文章來(lái)源】：上海海洋大學(xué)上海市

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

MabinlinII和密碼子優(yōu)化后MabinlinIIPlus的序列比對(duì)Fig.1-1SequencealignmentofMabinlinIIandMabinlinIIPlusaftercodonoptimization

區(qū)間(0.8-1.0)，GC 含量為 58.55%，達(dá)到了 GC 值理想?yún)^(qū)間(30%-70%)，提高了子利用率[46]。終止密碼子 TAG 被替換為 TAA。MabinlinII Plus 與 Mabinlin列比較圖 1-1，合成的 MabinlinII Plus 的長(zhǎng)度和結(jié)構(gòu)如圖 1-2 所示。圖 1-1 MabinlinII 和密碼子優(yōu)化后 MabinlinII Plus 的序列比對(duì)Fig.1-1 Sequence alignment of MabinlinII and MabinlinII Plus after codon optimization

圖 1-3 MabinlinII(AB)和密碼子優(yōu)化后 MabinlinII(AB) Plus 的序列比對(duì)Fig. 1-3 Sequence alignment of MabinlinII (AB) and MabinlinII (AB) Plus after codon optimization圖 1-4 MabinlinⅡ(AB) Plus 氨基酸序列結(jié)構(gòu)示意圖Fig. 1-4 Schematic diagram of the amino acid sequence of MabinlinII (AB) Plus2.3.2 目的片段 MabinlinII Plus 的獲得根據(jù)質(zhì)粒 pUC57-simple-MabinlinII Plus 中包括的 XhoI 和 BamHI 酶切位點(diǎn)，這兩種內(nèi)切酶對(duì)質(zhì)粒pUC57-simple-MabinlinIIPlus。電泳檢測(cè)結(jié)果如圖1-5所示。中片段 MabinlinII Plus 的正確大小為 474 bp，使用回收電泳對(duì)片段進(jìn)行回收。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]Marker-free轉(zhuǎn)基因番茄表達(dá)外源植物甜蛋白ThaumatinⅡ[D]. 楊飛.浙江師范大學(xué) 2010
[2]奇異果甜蛋白thaumatin基因二價(jià)載體在玉米中的共表達(dá)及其在酵母中的表達(dá)[D]. 潘寧.首都師范大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3430370